[發明專利]一種針對食品中風險添加物質的快速篩查鎖定方法

有效

• 申請號: 201711102786.8
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN109781915B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 許國旺;傅燕青;趙春霞;路鑫;周智慧
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/86
• 分類號: G01N30/86
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種針對食品中風險添加物質的快速篩查鎖定方法，所述風險添加物質為磺胺類藥物、喹諾酮類、四環素類和beta-受體抑制劑類藥物，其特征在于：該方法包括如下步驟：

（1）將食品樣品利用超高效液相色譜-高分辨質譜聯用平臺進行一級、二級質譜數據的同時采集，從而獲得原始數據；

具體步驟：稱取200 mg均質過的肉樣樣品置于2 mL離心管中，先后加入1 mL含1% 甲酸的乙腈和10 μL 濃度為1.6 μg/mL的內標溶液，最后加入氧化鋯小球封口；采用混合研磨儀將樣品進行進一步的均質提取，混合研磨儀的參數設置為頻率為25 Hz的條件下均質1分鐘，重復5次；隨后置于離心機中在4 ^oC，14000 rpm的條件下離心10 min，取1 mL上清液至另一2 mL離心管中，置于凍干機中進行凍干；凍干后的樣品加入200 μL 20% 的ACN 進行復溶，渦旋1 min，然后置于離心機中在4 ^oC，15000 rpm的條件下離心10 min，取上清液在相同條件下再進行一次離心；最終的上清液轉移至進樣瓶，采用超高效液相色譜- 高分辨質譜聯用的一級、二級質譜同時采集方法進行分析，最終得到被分析肉樣樣品的原始數據；

（2）潛在風險化合物的快速篩查鎖定：

1）將經過峰匹配以及濾噪處理的原始數據，進行均值偏差倍率計算，均值偏差倍率大于等于20的即被認為是潛在風險化合物，從而實現潛在風險化合物的快速篩查鎖定；

具體步驟：采集的原始數據通過儀器自帶軟件進行峰匹配提取離子，并經過相應的噪音過濾處理除掉干擾離子之后，余下離子采用均值偏差倍率計算的方法用于潛在風險化合物的快速篩查；均值偏差倍率的計算公式為：

其中，x代表某一離子在不同樣品中的離子響應，代表上述離子在所有樣本中響應的平均值，R代表每個樣本中上述離子偏離平均值的倍率；經過計算排序后，選定均值偏差倍率大于等于20的離子為潛在風險化合物；

2）通過具有相似結構的同類化合物具有特征的結構碎片或中性丟失，總結它們的特征碎裂規律，對特征碎裂規律進行特征結構匹配檢索，從而實現特定種類潛在風險化合物的快速鎖定；

具體步驟：第一步：原始數據經過峰匹配、噪音過濾處理之后得到一級提取離子信息表包括保留時間tr、母離子精確質量質荷比m/z、離子響應；原始數據經過二級轉換軟件的轉換得到含有二級碎片的信息文件包括保留時間tr、母離子m/z、碎片離子m/z、掃描號信息；基于一級離子信息，過濾除掉二級信息中的干擾離子，得到濾噪后的二級信息，此步過程中的參數設置為母離子m/z匹配的質量精度偏差需在5 ppm以內，保留時間差值不得超過10s；

第二步：特征規律匹配檢索，根據總結的各類物質的特征碎片離子得到的特征碎裂規律，然后對上述濾噪后得到的二級信息進行檢索匹配，鎖定特定種類的風險化合物；匹配參數設置為離子m/z匹配的質量精度偏差需在10 ppm以內；

（3）結合數據庫檢索進行被鎖定潛在風險化合物的定性；

具體步驟：通過自建添加劑數據庫進行檢索用于潛在風險化合物的快速準確定性，對于自建添加劑數據庫無法定性的潛在風險化合物：首先，通過自建內源數據庫和HMDB進行內源物排除，然后通過DrugBank，Metlin和mzCloud數據庫進行初步定性，最后采用標準物質進行驗證。