[發(fā)明專利]一種一步檢出唾液中毒品四項的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711097145.8
• 申請日: 2017-11-09
• 公開（公告）號: CN107884577A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 司英杰;史晉海;王少雄;王興和;劉偉;向榮
• 申請（專利權(quán)）人: 成都中昆德潤科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 成都金英專利代理事務(wù)所(普通合伙)51218
• 代理人: 袁英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及毒品檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種一步檢測唾液中毒品四項的方法。

背景技術(shù)

現(xiàn)有的檢測唾液中毒品四項的方法由于制備的膠體金標(biāo)記物的質(zhì)量不夠穩(wěn)定、抗體蛋白質(zhì)發(fā)生器壁的吸附損耗等原因，在實際進行檢測時，容易發(fā)生特異度和敏感度方面的偏差，檢測結(jié)果中出現(xiàn)假陽性和假陰性的比例較高。現(xiàn)有技術(shù)中對唾液進行毒品檢測時一般需要對唾液進行預(yù)處理，不便于現(xiàn)場快速進行毒品檢測。

為了解決上述問題，本發(fā)明提出一種一步檢測唾液中毒品四項的方法，可以快速、準(zhǔn)確地檢測出唾液中的毒品，具有很高的檢測準(zhǔn)確度和檢測穩(wěn)定性，并且不需要對待檢測唾液進行預(yù)處理。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提出一種一步檢測唾液中毒品四項的方法，具體通過以下方案實現(xiàn)：采用苯胺還原法制備膠體金顆粒，分別標(biāo)記MET抗體、COC抗體、MOP抗體、KET抗體后混合，稀釋混勻并均勻涂布于膠金墊上，作為示蹤標(biāo)記物。在硝酸纖維素膜上，四個不同濃度的BSA-MET偶聯(lián)物、BSA-COC偶聯(lián)物、BSA-MOP偶聯(lián)物、BSA-KET偶聯(lián)物固定于四個檢測線（即T1、T2、T3、T4線），羊抗鼠二抗固定于質(zhì)控線（即C線）。依次將樣本墊、樣品處理墊、膠金墊、硝酸纖維素膜和吸水濾紙組裝，剪成膠體金試紙并裝入檢測卡中。金標(biāo)抗體與相應(yīng)的抗原、抗體發(fā)生特異性結(jié)合被截留而顯色，根據(jù)T線、C線顯色與否來判斷檢測結(jié)果。

本發(fā)明方法包括以下步驟：

一、膠體金溶液的配制

1、配制0.25%氯金酸溶液；

2、配制1%-2%苯胺溶液；

3、配制3%-5%十二烷基硫酸鈉(SDS)；

4、將100ml0.25%的氯金酸溶液加熱至沸騰，迅速加入1%-2%的苯胺溶液1ml以及20μL3%-5%的十二烷基硫酸鈉；

5、溶液由淺藍色，深藍，再加熱出現(xiàn)酒紅色，繼續(xù)煮沸20min；停止加熱，繼續(xù)攪拌至室溫。

二、膠體金標(biāo)記物的制備

1、取八個1.5 mL試管，分別加入1 mL膠體金溶液；

2、加入適量K₂CO₃把pH調(diào)整為8.0；

3、其中兩個管各加入5μg/mL MOP抗體、兩個管各加入12μg/mLMET抗體、兩個管各加入8μg/mLKET抗體、兩個管各加入9μg/mLCOC抗體，抗體混勻，振蕩30min；

4、加入10-15μL1%的甘油，混勻，振蕩30min；

5、8000rpm離心5min，輕輕吸除上清；

6、用100mL膠體金復(fù)溶液重懸浮膠體金沉淀制成濃縮液；

7、用復(fù)溶液將上述濃縮液稀釋到適當(dāng)?shù)谋壤?!-- SIPO -->

8、玻璃纖維素膜點樣，形成膠金墊，真空凍干3小時。

三、在硝酸纖維素膜上劃線

1、T1線用濃度為0.5mg/mL的MET-BSA偶聯(lián)物劃線，用于檢出1000ng/ml的的甲基安非他明（冰毒）；

2、T2線用濃度為0.8mg/mL的COC-BSA偶聯(lián)物劃線，用于檢出300ng/mL的可卡因；

3、T3線用濃度為0.75mg/mL的的MOP-BSA偶聯(lián)物劃線，用于檢出300ng/mL的嗎啡；

4、T4線用濃度為0.5mg/mL的的KET-BSA偶聯(lián)物劃線，用于檢出1000ng/mL的氯胺酮（K粉）；

5、 C線用2.0 mg/mL羊抗鼠多克隆抗體劃線；

6、 將硝酸纖維素膜置于40℃烘箱干燥4h。

四、樣品墊的處理制備

1、配制PH8的硼酸鹽沖液；

2、在硼砂硼酸緩沖液中加入NACl、Tween20、tritonX-100、酪蛋白鈉、使其終濃度分別為0.9%、0.2%、0.2%、0.2%；

3、將上述溶液按照一定比例鋪在樣品墊上，40℃烘箱干燥8h。

五、膠體金試紙條的組裝

1、將樣品墊、膠金墊、NC膜和吸收墊4部分按順序組裝；

2、將其組裝好后用剪刀剪成4mm/條后進行檢測。

六、檢測