[發(fā)明專利]一種腫瘤細(xì)胞異種移植斑馬魚模型、其構(gòu)建方法及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711091169.2
• 申請(qǐng)日: 2017-11-08
• 公開（公告）號(hào): CN109744199A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何明芳;檀愛民;王瑞雪;李建英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京艾莫瑞生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A01K67/027
• 分類號(hào): A01K67/027
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種患者來(lái)源的腫瘤細(xì)胞異種移植斑馬魚模型，其特征在于該斑馬魚胚胎移植有患者來(lái)源的腫瘤組織的原代單細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的模型，其特征在于所述移植是在受精后24-72小時(shí)內(nèi)進(jìn)行，進(jìn)一步優(yōu)選36-60小時(shí)內(nèi)，更優(yōu)選在48小時(shí)進(jìn)行。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的模型，其特征在于所述移植的部位在胚胎卵黃囊。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的模型，其特征在于所述原代單細(xì)胞是經(jīng)過(guò)染色試劑染色的，優(yōu)選的染色試劑選自CM-Dil。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的模型，其特征在于所述的腫瘤選自胃癌或肺癌。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的模型在研究腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散或耐藥的機(jī)制，或者篩選有效的腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述篩選包括如下步驟：確定腫瘤候選藥物胚胎安全范圍內(nèi)的最高藥物濃度；以胚胎安全范圍內(nèi)的藥物濃度的候選藥物處理所述的斑馬魚胚胎，并選用候選藥物的溶解溶劑作為對(duì)照藥物同法處理；在熒光顯微鏡下對(duì)斑馬魚胚胎中患者來(lái)源的細(xì)胞的增殖、擴(kuò)散的情況進(jìn)行定性分析或/和定量分析。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述定量分析按下式公式計(jì)算抗腫瘤效果：

藥物的腫瘤抑制率＝(藥物處理組的熒光強(qiáng)度/對(duì)照組的熒光強(qiáng)度)*100％。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于候選藥物處理的時(shí)間為持續(xù)2到5天，優(yōu)選3天。

10.根據(jù)權(quán)利要求6-8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤選自胃癌，所述藥物選自5-氟尿嘧啶。

11.根據(jù)權(quán)利要求6-8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤選自肺癌，所述藥物選自吉非替尼、順鉑或多西他賽的一種或二種聯(lián)用。

12.一種患者來(lái)源的腫瘤細(xì)胞異種移植斑馬魚模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

(1)將患者來(lái)源的腫瘤臨床手術(shù)組織標(biāo)本解離成原代單細(xì)胞；

(2)將解離所得的原代單細(xì)胞染色；

(3)將步驟(2)得到的原代單細(xì)胞注射到斑馬魚胚胎卵黃囊內(nèi)。

13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的構(gòu)建方法，其特征在于：

步驟(1)所述的解離包括：將樣本在生理鹽水中進(jìn)行無(wú)菌清潔后，在磷酸鹽緩沖液中剪切成小塊，經(jīng)胰酶消化至解離完全，離心，去除胰酶；

步驟(2)所述染色，使用的染料為CM-Dil，染料濃度為1-5μg/ml，染色時(shí)間為1-10小時(shí)，染色后去除染料，磷酸鹽緩沖液洗滌并重懸至細(xì)胞密度為5×10³-5×10⁵個(gè)/μl；

步驟(3)所述的注射包括：將受精后36-60小時(shí)的斑馬魚胚胎固定，采用顯微注射器在體視鏡下，將10-30nl，優(yōu)選為20nl的步驟(2)得到的原代單細(xì)胞注射入斑馬魚胚胎卵黃囊內(nèi)。

14.根據(jù)權(quán)利要求12-13任一項(xiàng)所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的步驟(3)后還包括使用熒光顯微鏡進(jìn)行定性分析或/和定量分析的步驟。

15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的構(gòu)建方法，其特征在于在異種移植細(xì)胞后的第1-7天內(nèi)，將斑馬魚胚胎用三卡因麻醉，經(jīng)熒光顯微鏡觀察熒光細(xì)胞在斑馬魚體內(nèi)的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散情況。