[發明專利]1,3?二甲基?5,6?二氨基脲嘧啶的高效液相色譜分析方法

在審

• 申請號: 201711090299.4
• 申請日: 2017-11-08
• 公開（公告）號: CN107884492A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 程華農;周波;高廣超;李玉剛
• 申請（專利權）人: 青島科技大學;青島銀科恒遠化工過程信息技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙)37104
• 代理人: 張世功

技術領域：

本發明涉及一種1,3-二甲基-5,6-二氨基脲嘧啶(二甲基-DAU)的高效液相色譜分析方法。

背景技術：

二甲基-DAU為1，3-二甲基-5，6-二氨基脲嘧啶的簡稱，1，3-二甲基-5，6-二氨基脲嘧啶有時也稱為1，3-二甲基-4,5-二氨基脲嘧啶或1,3-二甲基-5,6-二氨基嘧啶-2,4-二酮。目前，絕大部分文獻中1,3-二甲基-5,6-二氨基脲嘧啶(二甲基-DAU)的分析方法是將二甲基-DAU趁熱過濾，加入甲酸，在95℃～100℃甲酰化，生成穩定的二甲基-FAU，結果以二甲基-FAU含量(mg/100mL)表示,采用工業碘量法分析，由消耗的Na₂S₂O₃溶液體積計算出含量。這種方法步驟繁瑣，耗時耗力。

鄭翔龍，胡熙恩使用反相高效液相色譜快速分析二甲基-DAU，流動相為含濃度0.02mol/L磷酸二氫鉀(體積分數4％)的乙腈水溶液(pH3～4)，流速為1mL/min，檢測波長為226nm，進樣量5μL。胡熙恩，鄭翔龍雖然使用了高效液相色譜分析二甲基-DAU，但是所用檢測波長為226nm，此波長在分析作為咖啡因重要中間體的二甲基-DAU時存在以下缺點：1，3-二甲基-5-亞硝基-6-氨基脲嘧啶加氫還原為二甲基-DAU的過程中，雜質多，226nm下檢測干擾大，可能對雜質產生響應。并且在二甲基-DAU甲酰化為1，3-二甲基-6-氨基-5-甲酰胺基脲嘧啶的過程中，226nm條件下無法對1，3-二甲基-6-氨基-5-甲酰胺基脲嘧啶中的二甲基-DAU進行分析。而300nm針對二甲基-DAU的選擇性強，可以克服以上問題，在某些雜質或者1，3-二甲基-6-氨基-5-甲酰胺基脲嘧啶的存在下，對二甲基-DAU進行分析。

發明內容：

本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種快速、高效、便利的1,3-二甲基-5,6-二氨基脲嘧啶(二甲基-DAU)的液相色譜分析方法。本發明方法包括二甲基-DAU分析原料的預處理方法及其高效液相色譜定性、定量分析方法。

為了實現上述發明目的，本發明的1,3-二甲基-5,6-二氨基脲嘧啶的高效液相色譜分析方法按照以下步驟操作：

第一步，1,3-二甲基-5,6-二氨基脲嘧啶(二甲基-DAU)分析原料的預處理

將二甲基-DAU分析原料熱過濾，取樣，超聲5min，二甲基-DAU分析原料用流動相稀釋2500倍或者5000倍，得到二甲基-DAU分析樣品，所述流動相是體積比為95:5的磷酸二氫鉀(0.02mol/L)和乙腈；

稀釋方法是：為取樣的二甲基-DAU首先加體積比為95:5的磷酸二氫鉀(0.02mol/L)和乙腈定容于50ml容量瓶，再從中精確取1ml加體積比為95:5的磷酸二氫鉀(0.02mol/L)和乙腈定容于50ml容量瓶，即相當于全部二甲基-DAU樣品稀釋為2500ml二甲基-DAU溶液；或者二甲基-DAU首先加體積比為95:5的磷酸二氫鉀(0.02mol/L)和乙腈定容于50ml容量瓶，再從中精確取1ml加體積比為95:5的磷酸二氫鉀(0.02mol/L)和乙腈定容于100ml容量瓶，即相當于全部二甲基-DAU樣品稀釋為5000ml二甲基-DAU溶液，優選5000倍；

第二步，二甲基-DAU的高效液相色譜分析

將二甲基-DAU分析樣品通過高效液相色譜檢測，液相色譜進樣量為20μL，液相色譜流動相為0.02mol/L的磷酸二氫鉀和乙腈的溶液，0.02mol/L磷酸二氫鉀和乙腈的體積比為95:5，pH＝2.68，流速為1ml/min；色譜柱采用Syncronis C-18柱250mm×4.6mm，色譜柱溫度為25℃，液相色譜的檢測器為紫外檢測器；根據純二甲基-DAU的光譜圖，紫外檢測器的檢測波長為275nm-300nm，優選300nm，二甲基-DAU的停留時間為5.66min，二甲基-DAU的定量方法為外標法，在室溫下于精密天平上分別稱量0.2g、0.3g、0.4g，0.5g純品二甲基-DAU，精確記錄質量，分別于1L容量瓶中定容，配成二甲基-DAU標準溶液；f＝標樣濃度(mg/L)/標樣峰面積，f為一系列二甲基-DAU標樣的濃度對其各自峰面積作圖的直線的斜率，稱為f因子，樣品百分含量＝樣品峰面積×f×稀釋倍數/取樣量/10000。