[發(fā)明專利]采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711090268.9 | 申請日： | 2017-11-08 |
| 公開（公告）號： | CN107884581A | 公開（公告）日： | 2018-04-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王愛萍;周景明;張改平;趙軍;劉紅亮;祁艷華;胡小宏;劉燕凱;李春革;牛艷;孫國蘋 | 申請（專利權(quán)）人： | 鄭州大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/535;G01N33/577;G01N21/76 |
| 代理公司： | 鄭州異開專利事務(wù)所(普通合伙)41114 | 代理人： | 韓華 |
| 地址： | 450001 河南省鄭*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 采用 化學(xué) 發(fā)光 法定 檢測 曲霉 毒素 試劑盒 | ||
1.一種采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：是由空白發(fā)光板、包被抗體、酶標抗體、赭曲霉毒素A標準、發(fā)光底物、緩沖液、洗滌液組成；所述酶標抗體采用只與OTA特異性結(jié)合的單克隆抗體，其亞型為重鏈IgG1，輕鏈Kappa型，親和力達2.11×1011L/mol。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述酶標抗體采用的單克隆抗體是將篩選出的陽性單抗用辛酸-硫酸銨法純化后，通過簡易過碘酸鈉法偶聯(lián)得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述包被抗體的制備方法為：將合成的OTA-BSA分別加入弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑用乳化劑乳化，通過背部皮下多點注射的方法，免疫8周齡的雌性BALB/c小鼠，50μg/只；間隔2周免疫一次，共免疫四次，取效價高的小鼠的脾臟與瘤細胞進行細胞融合，篩選陽性克隆，再通過體內(nèi)誘生腹水的方法大量制備抗OTA單克隆抗體，最后純化得到。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述赭曲霉毒素A標準從OTA的純品中稀釋得到，稀釋液為甲醇:水=7:3，共7瓶，其OTA的濃度分別為0ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、16ng/mL、32ng/mL、64ng/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述發(fā)光底物的制備方法為：以0.1mol/l過氧化脲為氧化劑，和緩沖液磷酸氫二鈉-檸檬酸配制發(fā)光底物A；以0.05mol/l魯米諾為發(fā)光劑，和緩沖液Tris-HCL配制成發(fā)光底物B。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述緩沖液包括：采用0.05M pH9.6的CBS緩沖液作為包被緩沖液，采用5%脫脂奶+0.05M pH7.4的PBST作為封閉液，采用0.05M pH7.5 Tris-HCL緩沖液作為酶稀緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述洗滌液為PBS+0.1-0.5%Tween-20。
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