[發明專利]采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒

在審

• 申請號: 201711090268.9
• 申請日: 2017-11-08
• 公開（公告）號: CN107884581A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 王愛萍;周景明;張改平;趙軍;劉紅亮;祁艷華;胡小宏;劉燕凱;李春革;牛艷;孫國蘋
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙)41114
• 代理人: 韓華

1.一種采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：是由空白發光板、包被抗體、酶標抗體、赭曲霉毒素A標準、發光底物、緩沖液、洗滌液組成；所述酶標抗體采用只與OTA特異性結合的單克隆抗體，其亞型為重鏈IgG1，輕鏈Kappa型，親和力達2.11×10¹¹L/mol。

2.根據權利要求1所述的采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述酶標抗體采用的單克隆抗體是將篩選出的陽性單抗用辛酸-硫酸銨法純化后，通過簡易過碘酸鈉法偶聯得到。

3.根據權利要求1所述的采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述包被抗體的制備方法為：將合成的OTA-BSA分別加入弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑用乳化劑乳化，通過背部皮下多點注射的方法，免疫8周齡的雌性BALB/c小鼠，50μg/只；間隔2周免疫一次，共免疫四次，取效價高的小鼠的脾臟與瘤細胞進行細胞融合，篩選陽性克隆，再通過體內誘生腹水的方法大量制備抗OTA單克隆抗體，最后純化得到。

4.根據權利要求1所述的采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述赭曲霉毒素A標準從OTA的純品中稀釋得到，稀釋液為甲醇:水=7:3，共7瓶，其OTA的濃度分別為0ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、16ng/mL、32ng/mL、64ng/mL。

5.根據權利要求1所述的采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述發光底物的制備方法為：以0.1mol/l過氧化脲為氧化劑，和緩沖液磷酸氫二鈉-檸檬酸配制發光底物A；以0.05mol/l魯米諾為發光劑，和緩沖液Tris-HCL配制成發光底物B。

6.根據權利要求1所述的采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述緩沖液包括：采用0.05M pH9.6的CBS緩沖液作為包被緩沖液，采用5%脫脂奶+0.05M pH7.4的PBST作為封閉液，采用0.05M pH7.5 Tris-HCL緩沖液作為酶稀緩沖液。

7.根據權利要求1所述的采用化學發光法定量檢測赭曲霉毒素的試劑盒，其特征在于：所述洗滌液為PBS+0.1-0.5%Tween-20。