[發明專利]一種用于胰腺癌診療一體化的納米探針及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201711083886.0
• 申請日: 2017-11-07
• 公開（公告）號: CN108096588A
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發明（設計）人: 王中秋;宋麗娜;陳曉;童明敏
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫院
• 主分類號: A61K49/12
• 分類號: A61K49/12;A61K49/08;A61K49/10;A61K49/18;B82Y5/00;B82Y15/00;A61K47/36;A61K47/02;A61K47/26;A61K9/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 黃天天

1.一種用于胰腺癌診療一體化的納米探針，其特征在于，所述納米探針選擇以survivin mRNA作為腫瘤靶點，通過殼聚糖對三氧化二鐵納米顆粒表面進行修飾及對survivin反義寡聚脫氧核苷酸進行羧基化修飾，在偶聯劑的作用下，使殼聚糖修飾的三氧化二鐵納米顆粒與羧基化的survivin反義寡聚脫氧核苷酸進行反應，獲得以survivinmRNA為靶點的診療一體化納米探針。

2.權利要求1所述的納米探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)共沉淀法制備γ-Fe2O3納米顆粒并用殼聚糖修飾；

(2)制備羧基化survivin反義寡聚脫氧核苷酸；

(3)取羧基化的Survivin反義寡聚脫氧核苷酸，用EDC/NHS溶液室溫活化，然后加入殼聚糖修飾的磁性鐵納米顆?；旌喜⒄袷?，將得到的混合液磁分離并洗滌，洗去未結合的游離DNA，得到用于胰腺癌診療一體化探針，然后重懸于緩沖液中保存備用。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，通過如下方法制備得到殼聚糖修飾的磁性納米顆粒:

1)配制200mL pH值為1～2的0.01M FeCl3·6H2O和0.006M FeSO4·7H2O的混合溶液，備用；

2)將0.03g殼聚糖粉末溶解于3ml 1％的醋酸溶液中，配制殼聚糖溶液，備用；

3)在氮氣的保護下將氨水逐漸滴入步驟1)得到的混合溶液，同時攪拌溶液，混合溶液液的pH值上升到≧9，得到黑色的沉淀物；

4)使用磁分離洗滌法洗滌若干次步驟3)中獲得的黑色沉淀物；

5)用0.1M的鹽酸調節步驟4)中溶液pH值至2.0至3.0之間，在95-100℃鼓入空氣，攪拌1h左右直至溶液變成棕紅色，獲得γ-Fe2O3納米顆粒；

6)將步驟5)中的溶液稀釋到濃度為3至4mg/mL；

7)將步驟2)中配制好的溶液加入到20ml步驟6)溶液中，室溫充分攪拌4h后磁分離法水洗3-4次，洗去游離的殼聚糖；

8)將步驟7)中的溶液，經超聲分散后，用0.1M的鹽酸調節pH值至4.0-5.0之間，于4℃保存備用。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，通過如下方法制備羧基化survivin反義寡聚脫氧核苷酸：

1)通過化學合成獲得序列為5’CTGAGAAAGGGCTGCCAGTCTCAG-3’的反義寡聚脫氧核苷酸；

2)通過共價連接，在其5’端進行羧基化修飾，獲得5’COOH-CTGAGAAAGGGCTGCCAGTCTCAG-3’寡聚脫氧核苷酸。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，Survivin反義寡聚脫氧核苷酸與EDC/NHS的摩爾比為1:1至1:10。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，羧基化Survivin反義寡聚脫氧核苷酸與殼聚糖修飾的磁性鐵納米顆粒按照1:10至1:100的摩爾比進行混合。

7.權利要求1所述的納米探針在制備用于胰腺癌診療一體化的試劑中的應用。