[發明專利]紅球菌菌株YF28-1-4的誘變篩選方法及應用

在審

• 申請號: 201711083328.4
• 申請日: 2018-02-11
• 公開（公告）號: CN108251412A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 楊蕊琪;常思靜;張威;章高森;陳拓;劉光琇
• 申請（專利權）人: 中國科學院寒區旱區環境與工程研究所
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N15/01;A62D3/02;C12R1/01;A62D101/20
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 王新生

1.一種紅球菌菌株YF28-1-4的誘變篩選方法，其特征在于：首先通過重離子輻照對紅球菌(Rhodococcus erythropolis YF28-1(8))基因組進行初次誘變，篩選出降解效果好的菌株再次通過超強誘變劑NTG對其進行復誘變，得到紅球菌突變體庫，再通過原油平板和和GC-MS的篩選，得到轉錄系統和翻譯系統發生突變的菌株YF28-1-4。

2.根據權利要求1所述的紅球菌菌株YF28-1-4的誘變篩選方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)重離子輻照對紅球菌進行初次誘變：將紅球菌(Rhodococcus erythropolis YF28-1(8))制備為菌懸液，通過重離子輻照對菌懸液進行初次誘變，重離子束流為12C6+離子束，能量為831MeV，LET為45keV/μm，得到重離子輻照過的初次誘變菌懸液，通過原油平板篩選出降解效果好的菌株得到初次誘變紅球菌；

2)接著用化學誘變劑NTG對紅球菌進行復誘變：將初次誘變紅球菌制備為菌懸液，以NTG母液對菌懸液進行復誘變，得到NTG處理過的復誘變菌懸液；

3)用原油平板篩選轉錄翻譯系統發生突變的菌株：將步驟2)得到的NTG處理過的復誘變菌懸液培養至對數生長期前中期后，用牙簽將菌液接種于以原油為唯一碳源的MM瓊脂糖培養基中，在25℃的條件下培養7-15d，觀察菌株在培養基上的生長情況，挑選菌落直徑大的單菌落分別接于裝有5mL液體培養基LB的試管中至對數生長期后，然后再接種于含有1％原油為唯一碳源的MM液體培養基中，進行GC-MS篩選，得到高效原油降解菌株YF28-1-4。

3.根據權利要求2所述的紅球菌菌株YF28-1-4的誘變篩選方法，其特征在于：MM液體培養基的配方為：氯化鎂3.5g，硝酸銨1.0g，氯化鉀0.35g，氯化鈣0.05g，溴化鉀0.08g，氯化鐵0.01g，硫酸鋅0.01％與氯化鍶2.4％混合的金屬鹽溶液1mL，磷酸氫二鉀10％與磷酸二氫鉀10％混合的磷酸鹽溶液10mL，ddH2O 989mL，pH調節至7.5左右。

4.根據權利要求1-3任意一項所述的紅球菌菌株YF28-1-4的應用，其特征在于：菌株YF28-1-4應用在原油降解中。

5.根據權利要求1所述的紅球菌菌株YF28-1-4的誘變篩選方法的應用，其特征在于：紅球菌菌株YF28-1-4的誘變篩選方法應用在激活降解基因中。