[發(fā)明專利]一種富硒酵母的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711083198.4
• 申請日: 2017-11-07
• 公開（公告）號: CN107868778A
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發(fā)明（設計）人: 張德釗;李璐;尹凱欣
• 申請（專利權）人: 常州禾吉紡織品有限公司
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N13/00;C12N1/36;C12N1/16
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司11403
• 代理人: 馬驍

1.一種富硒酵母的制備方法，其特征在于，該制備方法包括如下步驟：

（1）將土樣加入酵母菌液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，得酵母培養(yǎng)液，取酵母培養(yǎng)液用質量分數(shù)為0.9%的生理鹽水進行梯度稀釋至10^-6稀釋級，得稀釋后酵母菌培養(yǎng)液，將酵母菌培養(yǎng)液涂布于酵母菌平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，挑取菌徑最大的酵母菌單菌落平板劃線2~3次，得純化后酵母菌單菌落；

（2）挑取上述純化后酵母菌單菌落接種至酵母菌液體培養(yǎng)基，活化培養(yǎng)，得酵母菌活化培養(yǎng)物，將亞硒酸鈉按質量比1:1000加入馴化和篩選培養(yǎng)基混合，得一級馴化和篩選培養(yǎng)基，將酵母菌活化培養(yǎng)物接種至一級馴化和篩選培養(yǎng)基，培養(yǎng)，得一級馴化后酵母菌菌落，將亞硒酸鈉按質量比1:500加入馴化和篩選培養(yǎng)基混合，得二級馴化和篩選培養(yǎng)基，挑取馴化酵母菌菌落接種至二級馴化和篩選培養(yǎng)基，培養(yǎng)，得二級酵母菌發(fā)酵液，將二級酵母菌發(fā)酵液用無菌水將其稀釋至10^-3的稀釋級，將亞硒酸鈉按質量比1:300加入馴化和篩選培養(yǎng)基混合，得三級馴化和篩選培養(yǎng)基，將稀釋后發(fā)酵液涂布于三級馴化和篩選培養(yǎng)基培養(yǎng)，得三級馴化后酵母菌菌落，將三級酵母菌培養(yǎng)物重復涂布培養(yǎng)3~4次，得硒抗性馴化后酵母菌菌落；

（3）挑取硒抗性馴化后酵母菌菌落接種至酵母菌平板培養(yǎng)基中，活化培養(yǎng)，得活化酵母菌落，取無菌水洗滌活化酵母菌落，倒入盛有玻璃珠的容器中，振蕩，并于搖床上震蕩，得到單細胞菌懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)，用無菌水將單細胞菌懸液調整至細胞濃度為10^-6~10^-7個/mL，紫外燈預熱，取制備好的單細胞菌懸液置于無菌平皿內，置磁力攪拌器上攪拌，紫外燈照射，得處理的菌懸液，取處理的菌懸液0.1mL涂布于酵母菌平板培養(yǎng)基，培養(yǎng)，挑選出菌徑最大的單菌落接種至種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)，得紫外誘變后酵母菌培養(yǎng)液，干燥，得紫外誘變后酵母菌菌株；

（4）將亞硒酸鈉按質量比1:250加入發(fā)酵培養(yǎng)基混合，得富硒發(fā)酵培養(yǎng)基，馴化誘變后酵母菌菌株接種至富硒發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)，得馴化誘變酵母菌培養(yǎng)物，離心，取沉淀，用蒸餾水洗滌沉淀，再加入蒸餾水，離心，除上清液，此步驟反復2~3次，得到去培養(yǎng)液濕酵母，將濕酵母干燥，冷卻，得富硒酵母粉。

2.根據(jù)權利要求1所述的果富硒酵母的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中土壤樣品為廣西巴馬縣土壤樣品，土樣與酵母菌液體培養(yǎng)基的質量比為4:9，培養(yǎng)條件為30~35℃200r/min搖床培養(yǎng)18~24h。

3.根據(jù)權利要求1所述的果富硒酵母的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中酵母菌平板培養(yǎng)基的配方為按質量份數(shù)計，取葡萄糖12~15份，酵母膏8~10份，蛋白胨5~7份，硫酸鎂0.02~0.05份，瓊脂15~20份，pH值自然，121℃滅菌20min；酵母菌液體培養(yǎng)基：去掉酵母菌平板培養(yǎng)基的配方中的瓊脂，其他組分不變。

4.根據(jù)權利要求1所述的果富硒酵母的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中純化后酵母菌單菌落與酵母菌液體培養(yǎng)基的質量比為1:9，一級馴化和篩選培養(yǎng)基中亞硒酸鈉與馴化和篩選培養(yǎng)基的質量比為1:1000，酵母菌活化培養(yǎng)物與一級馴化和篩選培養(yǎng)基的質量比為1:8，二級馴化和篩選培養(yǎng)基中亞硒酸鈉與馴化和篩選培養(yǎng)基的質量比為1:500，三級馴化和篩選培養(yǎng)基中亞硒酸鈉與馴化和篩選培養(yǎng)基的質量比為1:300；馴化和篩選培養(yǎng)基的配方為按質量份數(shù)計，取葡萄糖8~10份，酵母膏15~18份，蛋白胨5~7份，硫酸鎂0.02~0.05份，瓊脂15~20份，亞硒酸鈉10~12份，pH值自然，121℃滅菌20min。

5.根據(jù)權利要求1所述的果富硒酵母的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中紫外誘變的條件為15W紫外燈25cm距離處照射180s。

6.根據(jù)權利要求1所述的果富硒酵母的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為按質量份數(shù)計，取葡萄糖10~12份，酵母膏18~20份，磷酸氫二鉀1~2份，牛肉膏10~15份，蛋白胨8~10份，pH4.8±0.2，121℃滅菌20min。

7.根據(jù)權利要求1所述的果富硒酵母的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中酵母菌菌株與富硒發(fā)酵培養(yǎng)基的質量比為1:9，沉淀與蒸餾水的質量比為1:50。