[發明專利]一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法

在審

• 申請號: 201711080308.1
• 申請日: 2017-11-06
• 公開（公告）號: CN107586730A
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 王友福
• 申請（專利權）人: 王友福
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/79
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于微生物農業技術領域，涉及一種淡紫擬青霉菌劑的培養方法，具體涉及一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法。

背景技術

淡紫擬青霉作為一種生物防治菌劑，在防治蔬菜、水果花卉的根結線蟲病和青枯病、黃枯萎病、根腐病等根部死棵病方面效果非常優秀。

市場銷售上的淡紫擬青霉菌劑采用液體發酵培養和固體吸附烘干的生產方法，雖然生產菌劑的純度和孢子含量很高，但是生產成本和銷售價格以及每畝土地的防治成本也很高，致使淡紫擬青霉菌劑難以推廣。

發明內容

本發明針對以上不足，本發明所要解決的技術問題是提供一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法。本發明可以實現以下發明目的：

本發明的生產方法簡單，生產成本極低，純度和孢子含量高，雜菌少，脫落率低，穩定性高，在蔬菜和花卉方面的應用效果顯著。

為解決上述技術問題，采用以下技術方案：

一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法，其特征在于，所述一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法包括以下步驟：菌體分離培養、一級種子平板培養、二級種子固體培養、穩定處理、三級種子固體培養、規模固體培養。

一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法，其特征在于，所述一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法包括以下步驟：

1）菌體分離培養：用淡紫擬青霉菌株在PDA培養基上培養，并進行轉管培養；

2）一級種子平板培養：向轉管培養后的菌種管中加入含吐溫80的無菌水，制成孢子懸浮液，吸取孢子懸浮液接到PDA平板培養基上在溫箱里培養；

3）二級種子固體培養：將麩皮和玉米粉混合得料，水和料混合，滅菌；接種孢子懸浮液后培養，待料表面全部變白后，移入室溫條件下繼續培養；

4）穩定處理：將二級種子放入恒溫箱，以0.5-1℃的升溫速率升溫至28℃，然后以0.5-1℃的降溫速率降溫至-4℃，再升溫至25℃；

5）三級種子固體培養：將二級種子菌種和水、料混合，連續培養 2-10天；

6）規模固體培養：所述的規模培養，包括培養料的準備、混合方法、平面培養和粉粹包裝。

作為本發明優選的技術方案，所述穩定處理，將二級種子放入恒溫箱，22℃保持45min后，以0.5-1℃的升溫速率升溫至28℃，恒溫40min，然后以0.5-1℃的降溫速率降溫至-4℃，恒溫15min，再以1.5-2℃的升溫速率升溫至25℃，保持恒溫。

作為本發明優選的技術方案，其特征在于，所述二級種子固體培養，將麩皮和玉米粉按10-1:1的比例混合得料，水和料按1：1-10比例混合，滅菌；接種孢子懸浮液，置于25℃溫箱培養，待料表面全部變白后，3天翻料一次，移入室溫條件下繼續培養10d。

作為本發明優選的技術方案，所述三級種子固體培養，將麩皮和玉米粉按10-1:1的比例混合，二級種子淡紫擬青霉菌種和水、料按1：10-100:1-100的比例混合，然后將培養料鋪在瓷盤上，在室溫條件下培養，控制好溫度，連續培養 2-10天，然后封閉陰干后粉粹，包裝存放。

作為本發明優選的技術方案，所述三級種子固體培養，培養料鋪在瓷盤上的厚度為1-10cm。

作為本發明優選的技術方案，所述平面培養，將混合后的培養料攤鋪在平整的地面上，厚度為1-10cm，在18-28℃條件下進行發酵培養；1天后和培養基干燥結塊，在培養基內布滿白色菌絲后翻動一次，連續培養2-10天后，進行通風陰干。

作為本發明優選的技術方案，所得到的一種淡紫擬青霉菌劑，有效孢子量為2.0-2.2×10⁸cfu/g，雜菌率≤0.1%，脫落率≤3%。

本發明采用以上技術方案，與現有技術相比，具有以下優點：

（1）本發明生產的淡紫擬青霉菌劑的有效孢子量為2.0-2.2×10⁸cfu/g，雜菌率≤0.1%，脫落率≤3%。在本發明生產的淡紫擬青霉菌劑高效、低毒，殺蟲效果穩定，且對人畜和作物安全，安全性高。

（2）本發明的生產方法工藝簡單，生產成本極低，純度和孢子含量高，具有很高的經濟價值和社會價值。

具體實施方式

實施例1一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法

本發明提供了一種生產工藝簡單，生產成本極低，純度和孢子含量高的淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法，本發明的一種淡紫擬青霉菌劑的固體培養生產方法，包括以下步驟：

1、菌體分離培養

用常規組織分離法分離出淡紫擬青霉菌株，在PDA培養基上進行培養，并進行轉管培養。