[發明專利]一種人星狀病毒1型核酸檢測標準物質及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201711080300.5
• 申請日: 2017-11-06
• 公開（公告）號: CN108085412A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 徐蕾蕊;曾靜;汪琦;付溥博
• 申請（專利權）人: 北京出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發明公開一種人星狀病毒1型核酸檢測標準物質及其制備方法和應用，本發明人星狀病毒1型核酸檢測標準物質的RNA序列如SEQ ID No.1所示。本發明還具體公開了所述人星狀病毒1型核酸檢測標準物質的制備方法以及在人星狀病毒1型核酸檢測中作為標準物質的應用。本發明人星狀病毒1型核酸檢測標準物質無生物傳染性，容易制備，具有良好的均勻性和足夠的穩定性，且該標準物質具有準確、可溯源的特性值；既可作為人星狀病毒1型核酸定性檢測的陽性對照，又可以作為人星狀病毒1型核酸定量檢測的外部標準品，還可用于評價新的人星狀病毒1型核酸檢測方法，為人星狀病毒1型核酸檢測能力認證認可提供物質基礎，可被廣泛應用于各實驗室。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域。更具體地，涉及一種人星狀病毒1型核酸檢測標準物質及其制備方法和應用。

背景技術

Appleton等于1975年在胃腸炎患者的糞便中首次發現星狀病毒(HumanAstrovirus,HAstV)，各國每年都會出現不同程度地出現星狀病毒感染暴發情況。星狀病毒屬無衣殼的單股正鏈RNA病毒，直徑28～35nm，具有5～6個小角，使整個病毒粒子呈星狀結構。病毒基因長6.8kb，包括一個5’非編碼區(5’non-coding region,NCR)，三個開放讀碼框架(open reading frams,ORFs)ORF1a、ORF1b和ORF2，80個核苷酸的3’非編碼區和一個大約30個核苷酸的多聚腺苷酸尾)。星狀病毒可劃分為8個血清型HAstV-1～HAstV-8。目前，人星狀病毒1型(Human Astrovirus type1,HAstV-1)已被認為是引起嬰幼兒、老年人及免疫力低下者急性病毒性腸炎的重要病原之一。

目前，中國尚無人星狀病毒1型相關的標準物質。多數檢測實驗室采用自行構建的含有食源性病毒目的片段的重組質粒(Min BS,Noh YJ,Shin JH,et al.Assessment of the quantitative real-time polymerase chain reaction using a cDNA standard for human group A rotavirus[J].J Virol Methods,2006,137(2):280-6；胡秀華,何苗,劉麗,等.水中輪狀病毒實時定量PCR外標準品的構建[J].環境科學,2008(02):2380-2385.)或含有病毒顆粒的陽性樣本，如腹瀉患者糞便樣品(Schultz AC,Saadbye P,Hoorfar J,et al.Comparison of methods for detection of norovirus in oysters[J].Int J Food Microbiol,2007,114(3):352-6；Butot S,Putallaz T,Sanchez G,et al.Procedure for rapid concentration and detection of enteric viruses from berries and vegetables[J].Appl Environ Microbiol,2007,73(1):186-92.)作為相應食源性病毒PCR檢測的陽性對照。重組質粒構建方法簡單，無生物傳染性，便于運輸，但是無法對病毒RNA檢測的逆轉錄過程進行控制；而且這些重組質粒沒有權威機構認證，無法保證均勻性性和穩定性，沒有統一的使用方案，沒有準確的可溯源的量值，因此，在實際應用中，檢測結果的可靠性得不到保證，在定量分析時也很難直觀傳達病毒含量信息。含有病毒顆粒的陽性樣品有潛在傳染性，制備運輸困難，且反復凍融后病毒載量會明顯降低，因而也不是理想的標準樣品來源。

體外合成RNA無生物傳染性，均勻性良好，可對食源性病毒檢測的逆轉錄和PCR進行監控，尤其在理論上可采用物理或者化學方法進行定量，得到準確且具有溯源性的量值。目前，國內外尚沒有以人星狀病毒1型RNA片段為原料的標準物質。

因此，提供一種體外合成人星狀病毒1型RNA片段有效地發揮了實驗室內和實驗室間質量控制作用，具有廣闊的應用前景。

發明內容