[發(fā)明專(zhuān)利]一種人星狀病毒1型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711080300.5
• 申請(qǐng)日: 2017-11-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108085412A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐蕾蕊;曾靜;汪琦;付溥博
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京正理專(zhuān)利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一種人星狀病毒1型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的RNA序列如SEQID No.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人星狀病毒1型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性值為(5.52±0.88)×106拷貝/μL。

3.一種如權(quán)利要求1或2所述的人星狀病毒1型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)篩選人星狀病毒1型陽(yáng)性樣品，提取病毒RNA，逆轉(zhuǎn)錄后，擴(kuò)增出如SEQ ID No.5所示的DNA片段；

2)將步驟1)中所述DNA片段與質(zhì)粒載體連接構(gòu)建重組質(zhì)粒；

3)將步驟2)獲得的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞內(nèi)，增殖，提取重組質(zhì)粒；

4)采用限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)步驟3)提取得到的重組質(zhì)粒進(jìn)行單酶切，得到線(xiàn)性化重組質(zhì)粒；

5)以線(xiàn)性化重組質(zhì)粒為模板，體外轉(zhuǎn)錄合成獲得人星狀病毒1型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)候選物，稀釋?zhuān)?jīng)均勻性、穩(wěn)定性檢測(cè)后，進(jìn)行定值和不確定度評(píng)估，即可。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中擴(kuò)增出如SEQ ID No.5所示的DNA片段所用的引物如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述限制性?xún)?nèi)切酶為HamHⅠ限制性?xún)?nèi)切酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟5)中所述體外轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子為T(mén)7啟動(dòng)子，其序列為SEQ ID No.6所示，轉(zhuǎn)錄是從序列最后三個(gè)G中的第一個(gè)G開(kāi)始。

7.一種如權(quán)利要求1或2所述的人星狀病毒1型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在人星狀病毒1型核酸檢測(cè)中作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的應(yīng)用。

8.一種包含權(quán)利要求1或2所述的人星狀病毒1型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的試劑盒。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括用于檢測(cè)人星狀病毒1型核酸的RT-ddPCR引物和探針組合，所述RT-ddPCR引物和探針組合包含如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的引物和如SEQ ID No.4所示的探針；優(yōu)選的，所述探針5’端標(biāo)記FAM，3’端標(biāo)記BHQ。