[發(fā)明專利]一種檢測恩諾沙星的時(shí)間分辨熒光免疫試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711074441.6
• 申請(qǐng)日: 2017-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN109752523A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 杜道林;薛永來;杜霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇維賽科技生物發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577
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本發(fā)明公開了一種檢測恩諾沙星的時(shí)間熒光分辨熒光免疫分析試劑盒。所述檢測恩諾沙星的時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測試劑盒是由多孔包被板、緩沖液、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品、恩諾沙星的抗體凍干品、銪標(biāo)記的羊抗鼠抗體、洗滌液和增強(qiáng)液所組成。所述檢測恩諾沙星的時(shí)間熒光免疫分析試劑盒的檢測方法包括下列步驟：(1)免疫原的制備；(2)包被原的制備；(3)單克隆抗體的制備；(4)樣品的前處理及檢測。本發(fā)明檢測時(shí)間短、平均回收率高、樣品前處理簡單、能現(xiàn)場操作檢測，應(yīng)用廣泛，檢測成本低，同時(shí)具有檢測特異性強(qiáng)，批內(nèi)和批間差異小、靈敏度高和操作簡單快速，且特別適合于大批量樣品的檢測等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體的說，涉及一種檢測恩諾沙星的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒。

背景技術(shù)

恩諾沙星是氟喹諾酮類抗生素，具有下列特性：由于獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)，使其成為獸醫(yī)臨床藥物中十分重要的抗生素。恩諾沙星對(duì)革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌和支原體類病原菌均具有廣譜抗菌活性，在一定的濃度下對(duì)細(xì)菌支原體也具有殺菌作用，還能殺死對(duì)抗生素具有抗藥力的細(xì)菌，例如抗p一乳酸菌素、氨基糖昔等。恩諾沙星因其具有獨(dú)特的作用，自80年代開始就被廣泛的應(yīng)用于動(dòng)物和魚蝦類的疾病的預(yù)防和治療。但最近的研究發(fā)現(xiàn)，凡使用過恩諾沙星的動(dòng)物，在一定時(shí)期內(nèi)其產(chǎn)品都有殘留，因其具有神經(jīng)毒性和腎臟毒性，所以在動(dòng)物食品中殘留會(huì)對(duì)人類健康造成威脅和影響，歐美國家及我國均要求對(duì)其限量使用。2002年12月我國農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)文規(guī)定在所有食品動(dòng)物的肌肉、脂肪中最高殘留限量為100 μg /kg，在所有食品動(dòng)物的肝、腎中最高殘留限量為200 μg/kg。因此，恩諾沙星己經(jīng)列為獸藥殘留監(jiān)控的重點(diǎn)。檢測恩諾沙星殘留量的化學(xué)方法主要有薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣一質(zhì)聯(lián)機(jī)(GC/MS)、液一質(zhì)聯(lián)機(jī)(HPLC/MS)、毛細(xì)管電泳(CE)等，由于復(fù)雜的儀器設(shè)各和繁瑣的過程，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查。

免疫分析技術(shù)以其抗原抗體反應(yīng)的高度專一性，以及測定方法簡單、快速、靈敏度高、費(fèi)用低和適于現(xiàn)場大批量樣品篩選等優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)獸藥殘留分析中展示了廣泛的應(yīng)用前景。隨著農(nóng)藥殘留免疫學(xué)檢測技術(shù)不斷被完善和商品化，免疫學(xué)檢測技術(shù)會(huì)成為食品農(nóng)獸藥殘留和食品安全質(zhì)量控制的有效快速檢測手段。基于目前獸藥殘留診斷試劑的研究現(xiàn)狀，及時(shí)開發(fā)出優(yōu)于目前的、快速靈敏的檢測試劑可謂是當(dāng)務(wù)之急。雖然農(nóng)獸藥殘留分析的方法雖然有很多，但是利用免疫學(xué)技術(shù)進(jìn)行分析是特異性最好、檢測時(shí)間最短的方法。

而時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TR-FIA）由于其特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單、廉價(jià)，且特別適于大批量樣品的檢測等優(yōu)點(diǎn)而越來越被人們所重視和采用。目前還沒有針對(duì)恩諾沙星檢測的時(shí)間熒光免疫分析法的專利和文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種蔬菜水果中恩諾沙星殘留的檢測時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種快速簡便地檢測蔬菜水果中恩諾沙星的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒的檢測方法，用于定量或定性地檢測農(nóng)作物中恩諾沙星殘留量。

本發(fā)明目的之一是這樣實(shí)現(xiàn)的：檢測恩諾沙星的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒，其關(guān)鍵在于由多孔包被板、緩沖液、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品溶液、抗恩諾沙星的抗體凍干品、銪標(biāo)記的兔抗鼠抗體、洗滌液和增強(qiáng)液體所組成。

本發(fā)明目的之二是這樣實(shí)現(xiàn)的：檢測恩諾沙星的時(shí)間分辨熒光免疫分析試劑盒的檢測方法，包括免疫原、包被原和單克隆抗體的制備以及樣品前處理及檢測，其關(guān)鍵在于：

(1) 免疫原的制備：將半抗原恩諾沙星與牛血清白蛋白（BSA）偶聯(lián)，得到免疫原（恩諾沙星-BSA）；

(2) 包被原的制備：將半抗原恩諾沙星與卵血清白蛋白（OVA）偶聯(lián)，得到包被原（恩諾沙星-OVA）；

(3) 單克隆抗體的制備：