[發明專利]一種檢測恩諾沙星的時間分辨熒光免疫試劑盒

在審

• 申請號: 201711074441.6
• 申請日: 2017-11-05
• 公開（公告）號: CN109752523A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 杜道林;薛永來;杜霞
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測恩諾沙星的時間分辨熒光免疫分析試劑盒，其特征在于：由多孔包被板，緩沖液，恩諾沙星標準品，恩諾沙星的抗體凍干品，銪標記的羊抗鼠抗體，洗滌液和增強液所組成。

2.一種根據權利要求1所述檢測恩諾沙星的時間分辨熒光免疫分析試劑盒，包括免疫原、包被原和單克隆抗體的制備以及樣品前處理，其特征在于：

(1) 將恩諾沙星與牛血清白蛋白偶聯，得到免疫原；

(2) 將恩諾沙星與卵血清蛋白偶聯，得到包被原；

(3) 用步驟(1)的免疫原免疫小鼠，通過雜交瘤技術，得到分泌抗恩諾沙星的單克隆抗體的雜交瘤細胞株；

(4) 以體內誘生腹水法大量制備抗體，使用Protein G柱進行純化，獲得抗恩諾沙星的單克隆抗體

(5) 用步驟(2)的包被原包被固相載體；

(6) 將動物組織先經過酸解提取后，再過MAX柱凈化，最后加入衍生試劑和催化劑進行處理，得到待測產物；

(7) 將步驟(6)的待檢物進行測量熒光強度cps，對照標準曲線計算樣品中的恩諾沙星恩諾沙星含量。

3.根據權利要求1所述檢測恩諾沙星的時間熒光免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述的固相載體是多孔包被板，采用96孔的多微孔包被板作為固相載體。

4.根據權利要求1所述檢測恩諾沙星的時間熒光分辨免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述的衍生試劑是丁胺。

5.根據權利要求1所述檢測恩諾沙星的時間分辨熒光免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述的催化劑是腈基磷酸二乙酯。

6.根據權利要求1所述檢測恩諾沙星的時間熒光免疫分析法試劑盒，其特征在于：所述步驟(6)和(7)具體為取包被有恩諾沙星-OVA的微孔包被板，加入50 μL處理好的樣品到各自的微孔中，加入50 μL以緩沖液稀釋的恩諾沙星抗體，25~37℃振蕩0.5~1小時，洗滌液洗三次，加以緩沖液稀釋的100 μL Eu³⁺-羊抗鼠抗體，25~37℃振蕩0.5~1小時，洗滌液洗六次，加200 μL增強液振蕩5分鐘后測量熒光強度cps，從標準曲線計算樣品中的恩諾沙星含量。