[發明專利]一種凍干NK細胞表面抗原質控品及其制備方法

在審

• 申請號: 201711071957.5
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107576789A
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 李博
• 申請（專利權）人: 深圳市巴德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N15/14;C12N5/0783
• 代理公司: 廣東深宏盾律師事務所44364
• 代理人: 康宇寧

1.一種凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)收集人外周血細胞，經過密度梯度離心，將細胞懸液平鋪、離心，收集人外周淋巴細胞；

2)使用含有血清的磷酸鹽緩沖液或者漢克氏液(Hank’s buffer)沖洗；

3)加入抗人CD3和抗人CD16、CD56抗體，避光，孵育，經過離心，收集細胞，重新在磷酸鹽緩沖液或Hank’s液中懸浮細胞，洗脫多與抗體，離心收獲標記后的細胞；

4)將收獲的細胞，加入固定液，充分混勻后，避光固定；

5)洗脫固定液，使用流式細胞儀，計陽性細胞數，根據計數結果，在細胞凍干保護緩沖液中，稀釋陽性細胞；

6)將含有細胞的溶液分裝后冷凍；

7)抽真空凍干，至瓶內容物為白色或者淡黃色粉、餅狀；

8)從凍干機中取出，快速封口，保存。

2.根據權利要求1所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于：所述步驟1)中，經靜脈采血或者沖洗血沉棕黃層，收集人外周血細胞，將細胞懸液平鋪在蔗糖溶液或者商品化的人淋巴細胞分離液上，離心，使得不同密度的細胞聚集，收集人外周淋巴細胞。

3.根據權利要求1所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于：所述步驟3)中，加入抗人CD3和抗人CD16、CD56抗體，避光，15-30℃孵育15-30分鐘，經過離心，收集細胞，重新在磷酸鹽緩沖液或Hank’s液中懸浮細胞，洗脫未結合的多余抗體，離心收獲抗體標記的細胞。

4.根據權利要求1所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于：所述步驟4)中，將收獲的細胞，按照10³-10⁸個細胞/毫升的濃度，加入固定液，使用震蕩或者吹打的方式，充分混勻后，在2-30℃，避光，固定0.25-48小時。

5.根據權利要求1所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于：所述步驟5)中，稀釋陽性細胞濃度為10²-10⁸個細胞/毫升。

6.根據權利要求1所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于：所述步驟6)中，將含有細胞的溶液分裝成0.2-2毫升/瓶，置于-80至-20℃，冷凍4-72小時。

7.根據權利要求1所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于：所述步驟7)中，抽真空凍干12-96小時。

8.根據權利要求1所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法，其特征在于：所述步驟8)中，從凍干機中取出，快速封口，在-20-8℃條件下保存。

9.根據權利要求1-8所述的凍干NK細胞表面抗原質控品的制備方法所得到的凍干NK細胞表面抗原質控品。