[發(fā)明專利]C型CpG作為佐劑在HBV預(yù)防性以及治療性疫苗中的應(yīng)用及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711070653.7
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107812186B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張建;趙華俊;王冠;韓秋菊
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/29;A61P31/20
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 董潔

本發(fā)明公開了C型CpG M362作為佐劑在HBV預(yù)防性以及治療性疫苗中的應(yīng)用及其制備方法，以CpG M362為佐劑的HBV預(yù)防性疫苗區(qū)別于傳統(tǒng)的HBV預(yù)防性疫苗的最大優(yōu)點(diǎn)在于，不僅可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的體液應(yīng)答，而且可以增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞應(yīng)答。同時，以CpG M362為佐劑的HBV治療性疫苗應(yīng)用于臨床HBV治療過程中，可以改善慢性HBV感染導(dǎo)致的肝臟的免疫抑制微環(huán)境，逆轉(zhuǎn)HBV感染導(dǎo)致的免疫耐受，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞應(yīng)答和體液應(yīng)答，從而完全清除HBV。更重要的是，以CpG M362為佐劑的疫苗免疫接種后，可以誘導(dǎo)機(jī)體形成長期的免疫記憶，保護(hù)機(jī)體防止HBV的再次感染，為臨床HBV的預(yù)防以及慢性HBV的治療提供了一個新的有效策略。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)和基因工程疫苗領(lǐng)域，具體涉及C型CpG M362作為佐劑在HBV預(yù)防性以及治療性疫苗中的應(yīng)用及其制備方法。

背景技術(shù)

HBV感染危害全球人類的健康。雖然HBV預(yù)防性疫苗(鋁佐劑疫苗)的應(yīng)用已經(jīng)相當(dāng)普遍，但是仍有5％-10％的人口不能產(chǎn)生有效的抗HBV抗體(anti-HBs)，造成全球每年大約有350萬人患慢性HBV感染，其中25％-30％的患者死于由慢性HBV引起的肝硬化和肝癌。

目前，臨床上常用IFN-α和核酸類似物這兩種藥物治療慢性HBV，然而IFN-α和核酸類似物的治療效果有一定的局限性。IFN-α雖然有抗病毒效果，但是臨床治療率僅有20-40％；而核酸類似物在一定程度上能抑制HBV的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，但是并不具有HBV特異性，同時可能會導(dǎo)致副作用及其耐藥性的發(fā)生。因此，亟需開發(fā)一種新型安全有效的抗HBV疫苗用于HBV的預(yù)防和治療。由于缺乏理想的佐劑，使得HBV疫苗的研究面臨重大挑戰(zhàn)。

免疫佐劑，作為一種非特異性的免疫增強(qiáng)劑，可以改變抗原自身免疫原性差的弊端，與抗原一起或預(yù)先注入機(jī)體時可有效增強(qiáng)免疫應(yīng)答的強(qiáng)度或改變免疫應(yīng)答的類型。佐劑的作用機(jī)制主要包括以下幾個部分：改變抗原的物理性狀，延緩抗原的降解和排除，從而延長抗原在體內(nèi)的滯留時間，避免頻繁注射從而更有效地刺激免疫系統(tǒng)；刺激單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，增強(qiáng)其處理和提呈抗原的能力；刺激淋巴細(xì)胞的增生和分化，可提高機(jī)體初次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴度；改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。因此，通過佐劑，可以增強(qiáng)疫苗的免疫原性，增加機(jī)體的免疫應(yīng)答水平。

已有研究證明，慢性HBV的患者體內(nèi)CD4⁺T、CD8⁺T細(xì)胞免疫應(yīng)答功能缺失，同時高表達(dá)Treg細(xì)胞、IL-10免疫抑制分子。然而，當(dāng)前商業(yè)化的HBV疫苗是鋁佐劑疫苗，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生Th2型免疫應(yīng)答，但是不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗病毒的Th1型和CTL免疫反應(yīng)。因此，尋找/研發(fā)一種能有效激起機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的疫苗，打破慢性HBV患者免疫抑制的微環(huán)境，才能有效的治療慢性HBV的感染。

CpG ODN是指含有非甲基化的胞嘧啶和鳥嘌呤二核苷酸為核心序列的核苷酸序列。根據(jù)其生物活性以及化學(xué)組成的不同，CpG主要分為三類：A型CpG，B型CpG，C型CpG。A型CpG，比如ODN 1585、ODN2216、ODN2336，主要激活pDC，促進(jìn)IFN的分泌；B型CpG，比如ODN1826、ODN 7909、ODN 2006，主要激活NF-κB信號通路，促進(jìn)Th1型應(yīng)答的產(chǎn)生；C型CpG，比如ODN 2395、ODN M362，與B型CpG ODNs相比，C型CpG活化NF-κB信號通路以及產(chǎn)生IL-12細(xì)胞因子能力較弱，其能否作為HBV預(yù)防性以及治療性疫苗的佐劑目前沒有相關(guān)的報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種新型的HBV預(yù)防性以及治療性疫苗的佐劑及其制備方法。

在本研究中我們將通過分析C型CpG M362對機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用，闡明CpG M362作為抗HBV疫苗佐劑的細(xì)胞和分子機(jī)制，評價了其作為HBV疫苗佐劑的可行性。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：