[發明專利]用于檢測血清中HuA21抗體的ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201711069106.7
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107860925B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 程聯勝;婁陽;趙群;王鳳榮
• 申請（專利權）人: 合肥瀚科邁博生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

本發明公開了一種用于檢測血清中HuA21抗體的ELISA檢測試劑盒。該試劑盒包括標準抗原、捕獲抗體和檢測抗體；所述標準抗原為人源化HuA21抗體；所述捕獲抗體為抗人源化HuA21抗體的抗體1A4，所述檢測抗體為經生物素標記的抗人源化HuA21抗體的抗體1C9。本發明所提供的基于雙抗體夾心法檢測血清中人源化HuA21抗體含量的酶聯免疫(ELISA)試劑盒可實現對血清中人源化HuA21抗體含量的準確定量檢測，且穩定性好，操作簡便，費用也較傳統檢測方法低廉。因此具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫藥和技術領域，具體涉及一種用于檢測血清中HuA21抗體的ELISA檢測試劑盒。

背景技術

HuA21抗體(中國專利號ZL201410489895.X)是一種高親和力的全人源化的單克隆抗體，能特異性識別并結合人腫瘤細胞表面HER2抗原，從而使HER2高表達的乳腺癌細胞增殖生長受到抑制。實驗結果表明，相對于已經上市的曲妥珠單抗(商品名Herceptin，英文名Trastuzumab/Herceptin)，美國Genetech公司首先開發的抗HER2人源化單克隆抗體藥物，HuA21抗體能夠引起更強的抗原內吞作用，尤其是在Herceptin耐藥性的細胞株中，例如Herceptin耐藥性的BT474乳腺癌細胞株中，因此HuA21在抗體靶向藥物(比如抗體-化藥偶聯物ADC)的開發中具有很好的應用前景。不僅如此，HuA21還能抑制HER2的磷酸化，而HER2的磷酸化是HER2活化所必須的，進而抑制HER2下游MAPK,PI3K-Akt信號通路，這一現象在HuA21與Herceptin聯用更加明顯。而且，HuA21與Herceptin聯用能夠顯著抑制機體腫瘤的發展，這一結果在體內實驗和體外實驗都得到了證實。因此，HuA21在HER2高表達腫瘤例如乳腺癌的治療方面具有巨大的應用潛力。

無論是在臨床前研究的藥理學評價階段，對抗體藥物的藥代動力學進行研究，還是在臨床階段以及再后來的治療階段，確定藥物的治療窗濃度對患者合理給藥等，準確評估HuA21在生物體血液中的濃度都具有極其重要的意義。傳統的測量血藥濃度的方法主要有氣相色譜法(GC)、氣相-質譜聯用法(GC-MS)、高效液相色譜-質譜聯用法(HPLC-MS)等等。但是這些方法普遍價格高昂，而且需要專業的設備操作人員，分析時間也比較長，難以在臨床上開展。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種準確、高效、經濟的用于檢測血清中HuA21抗體的ELISA檢測試劑盒。

本發明所提供的用于檢測血清中HuA21抗體含量的酶聯免疫試劑盒，具體可包括標準抗原、捕獲抗體和檢測抗體；所述標準抗原為人源化HuA21抗體(中國專利號ZL201410489895.X)；所述捕獲抗體為抗人源化HuA21抗體的抗體1A4(作為包被原)，所述檢測抗體為經生物素標記的抗人源化HuA21抗體的抗體1C9。

在所述試劑盒中，所述抗人源化HuA21抗體的抗體1A4的重鏈的氨基酸序列具體如SEQ ID No.1所示；所述抗人源化HuA21抗體的抗體1A4的輕鏈的氨基酸序列具體如SEQ IDNo.2所示。

在所述試劑盒中，所述抗人源化HuA21抗體的抗體1C9的重鏈的氨基酸序列具體如SEQ ID No.3所示；所述抗人源化HuA21抗體的抗體1C9的輕鏈的氨基酸序列具體如SEQ IDNo.4所示。

進一步地，所述抗人源化HuA21抗體的抗體1A4是通過將核苷酸序列如SEQ IDNo.5所示的抗人源化HuA21抗體的抗體1A4的重鏈的編碼基因和核苷酸序列如SEQ ID No.6所示的抗人源化HuA21抗體的抗體1A4的輕鏈的編碼基因在受體細胞中進行表達得到的。其中，重鏈編碼基因和輕鏈編碼基因可為等摩爾使用。