[發明專利]一種干細胞樣記憶性T細胞體外誘導劑及誘導方法

有效

• 申請號: 201711067295.4
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107586758B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 周素芳;曾麒燕;賓曉蕓;陳安寧
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

本發明公開一種干細胞樣記憶性T細胞體外誘導劑及誘導方法，屬于細胞誘導劑和細胞誘導方法技術領域。所述的誘導劑包括紅桂木凝集素；所述的誘導劑還包括細胞因子IL?2；所述的干細胞樣記憶性T細胞為CD3+細胞的亞群。本研究發現了ALL聯合細胞因子IL?2可以在體外誘導TSCM細胞產生并促使增殖和集落形成，快速誘導CD3+T細胞擴增為TSCM，有效提高CD3+TSCM的絕對數和形成比例，其誘導效果優于單獨使用紅桂木凝集素或細胞因子IL?2進行擴增的效果。

技術領域

本發明屬于一種細胞培養誘導劑及細胞的誘導方法，具體涉及一種干細胞樣記憶性T細胞體外誘導劑及誘導方法。

背景技術

2005年，Zhang等在研究小鼠移植物抗宿主反應疾病(graft versus hostdisease，GVHD)模型中發現，一群來源于供體的CD8+T細胞在GVHD發生的過程中持續存在，造成宿主損傷。與初始T細胞或成熟記憶性T細胞相比，這群T細胞具有干細胞的特征，即能夠自我更新，在體內能夠分化產生中樞性和效應性記憶性CD8+T細胞，并且產生的這些子代細胞表現出記憶性T細胞的特征，能夠快速對再次免疫的抗原產生反應并且分化為效應細胞，引起GVHD。研究人員將這群細胞定義為“干細胞樣記憶性T細胞”，或稱為“TSCM細胞”。

TSCM細胞具備快速增殖能力，在歸巢因子IL-15和IL-7作用下，能夠快速的增殖，CD8+TSCM細胞在IL-15作用下能快速的分裂，這種分裂方式與干細胞非常類似，增殖的兩個子代細胞中，一個子代細胞繼續分化為其他細胞類型，另外一個自我復制，依然維持母代細胞的表型，因此雖然經歷多代細胞分裂，部分細胞仍然處于靜息狀態，依然具有產生子代細胞的增值和分化能力。在IL-7的刺激下，CD4+TSCM細胞具有相似的能力。TSCM細胞一方面可分泌具有殺傷能力的細胞因子，如IFN-γ、TNF-α、granzyme B 等；另一方面，在遇到抗原刺激時還可迅速分化成為效應T 細胞，中央記憶性T 細胞以及效應記憶性T 細胞，發揮其快速免疫應答的功能。

TSCM細胞具有很強的抗腫瘤功能，無論在動物模型和人源化小鼠黑色素瘤模型中均觀察到這種現象。研究人員推測TSCM細胞的抗腫瘤效應，除了可能由于其具有很強的增殖能力和分化能力，同時也與自身能夠產生抗腫瘤的細胞因子如IFN-γ有關。另外，TSCM白血病的治療中也表現出較強的免疫抗腫瘤能力。

這群細胞作為一種具有自我更新能力和多能性潛力的T細胞亞群，在諸多的免疫性疾病中都發揮著重要的作用。

上述研究結果提示TSCM細胞具備干細胞的特性，具有很強的增殖和分化能力，體外移植實驗表明其具有很強的生存能力，TSCM細胞能有效的擴增，并保持長效的記憶T細胞能力，TSCM細胞所具備的這些特征解決了臨床上移植細胞體外擴增難的問題。其次，TSCM細胞很強的生存能力使得植入體內細胞生存時間延長，并且自身能夠產生具有抗腫瘤功能的細胞因子。因此人們還可以進一步探索如何利用體外擴增TSCM細胞來作為新的過繼免疫治療策略。TSCM細胞有可能成為最為有效的ACT(the adoptive cell transfer，ACT)治療腫瘤的細胞類型。由于TSCM細胞在人體中的比例非常低，由此，探索如何能夠誘導這種細胞快速擴增的方法就變得尤為重要和迫切。

紅桂木凝集素(artocarpuslingnanensislectin，ALL)是一種性質穩定、凝集活性高的植物凝集素，有研究發現，ALL能誘導T細胞的活化，能促進人外周血單核細胞來源的樹突狀細胞的成熟及增殖。基于ALL在激活T細胞、樹突狀細胞增殖生長方面的重要作用，聯合細胞因子IL-2，本研究試圖探索ALL在體外是否可誘導人TSCM細胞的擴增，并檢測其在TSCM細胞誘導生成中的作用。

發明內容

本發明的目的是提供一種紅桂木凝集素聯合細胞因子IL-2在體外誘導人外周血CD3+T細胞產生人TSCM細胞的擴增。

本發明的另一目的是提供一種干細胞樣記憶性T細胞體外誘導擴增的方法。為實現本發明目的所使用的技術方案為：