[發明專利]一種干細胞樣記憶性T細胞體外誘導劑及誘導方法

有效

• 申請號: 201711067295.4
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107586758B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 周素芳;曾麒燕;賓曉蕓;陳安寧
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 李彥孚;何承鑫

1. 一種干細胞樣記憶性T細胞體外誘導劑，其特征在于，所述的誘導劑包括紅桂木凝集素；所述的誘導劑還包括細胞因子IL-2；所述的干細胞樣記憶性T細胞為 CD3⁺CD45RA⁺CD45RO^-CD62L⁺CCR7⁺CD95⁺CD122⁺細胞亞群；其中，所述的紅桂木凝集素的濃度為2.5 ~ 10μg/ml，所述的細胞因子IL-2的濃度為5 ~ 25 ng/ml。

2.一種干細胞樣記憶性T細胞體外誘導方法，其特征在于，具體步驟為：

（1）將分選獲得的CD3⁺細胞置于添加有流式細胞術用抗體的細胞培養液中培養；所述的流式細胞術用抗體包括human CD3-APC、FITC、human CD8-APC、human CD8-Pacific blue、human CD45RA-PE、human CD45RO-PE-Cy5、human CD62L-PE-Cy7、human CCR7-FITC、humanCD95-PE-Cy5和human CD122-PE的一種或多種；

（2）在培養液中加入誘導劑紅桂木凝集素和細胞因子IL-2進行誘導培養；所述的紅桂木凝集素的濃度為2.5 ~ 10μg/ml，所述的細胞因子IL-2的濃度為5 ~ 25 ng/ml；

（3）誘導培養完成后，分選出CD3⁺TSCM細胞；分選方法為在CD3⁺細胞中選定CD45RA⁺ CD45RO^－的細胞亞群，進一步再選出CD62L⁺ CCR7⁺的細胞亞群，隨后在這個亞群細胞的基礎上，選定CD95⁺ CD122⁺雙陽性細胞。

3.根據權利要求2所述的干細胞樣記憶性T細胞體外誘導方法，其特征在于，所述的紅桂木凝集素的濃度為7.5μg/ml，所述的細胞因子IL-2的濃度為12.5ng/ml。

4.根據權利要求2所述的干細胞樣記憶性T細胞體外誘導方法，其特征在于，所述的TSCM細胞培養時間在6 ~ 8天。

5.一種紅桂木凝集素在制備干細胞樣記憶性T細胞體外誘導劑的應用，其特征在于，所述的干細胞樣記憶性T細胞為CD3⁺CD45RA⁺CD45RO^-CD62L⁺CCR7⁺CD95⁺CD122⁺細胞亞群；所述的紅桂木凝集素的濃度為2.5 ~ 10μg/ml。

6.一種紅桂木凝集素和細胞因子IL-2的組合在制備干細胞樣記憶性T細胞體外誘導劑的應用，其特征在于，所述的干細胞記憶性T細胞為CD3⁺CD45RA⁺CD45RO^-CD62L⁺CCR7⁺CD95⁺CD122⁺細胞亞群；所述的紅桂木凝集素的濃度為2.5 ~ 10μg/ml，所述的細胞因子IL-2的濃度為5 ~ 25 ng/ml。