[發明專利]一種二苯醚類化合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711067113.3
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107815473B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 楊海英;杜剛;胡秋芬;胡秋月;劉赟;詹夢濤;陸小凱
• 申請（專利權）人: 云南民族大學
• 主分類號: C12P7/22
• 分類號: C12P7/22;C07C49/84;A61P31/04;C12R1/645
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠;謝喬良

1.一種二苯醚類化合物的制備方法，其特征在于所述二苯醚類化合物是以福士擬莖點霉（Phomopsis fukushii）菌株經發酵、提取、層析、純化后得到，其分子式為C₁₈H₂₀O₅，結構式為：

該化合物命名為：diphentherB；所述福士擬莖點霉（Phomopsis fukushii）菌株，菌株保藏編號為CCTCC M 2017632，保藏日期為2017年10月23日；制備方法包括以下步驟：

A、固體發酵：將菌株福士擬莖點霉（Phomopsis fukushii）在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基中于28℃培養7天，接種到含10~100mL液體種子培養基的50~500mL的三角瓶中，于28℃下在轉速180rpm旋轉震蕩的條件下震蕩培養5~10天得到含菌營養基，將其接種到大米固體培養基中培養得到發酵產物；

B、浸膏提取：將發酵產物中加入固液體積比1.5~3倍的有機溶劑超聲提取2~4次，每次4~8h，合并提取液，過濾，減壓濃縮至1/4~1/2體積時，靜置，濾除沉淀物，濃縮得到浸膏；

C、氯仿-丙酮硅膠柱層析：浸膏上硅膠柱層析，裝柱硅膠為200~300目，用量為浸膏重量6~8倍量；用體積比為1:0~0:1的氯仿和/或丙酮溶液梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經TLC監測，合并相同的部分；

D、石油醚-乙酸乙酯硅膠柱層析：將C步驟中8:2配比的氯仿-丙酮混合溶液進行洗脫得到的洗脫液上硅膠柱層析，裝柱硅膠為200~300目，用量為洗脫液重量6~8倍，用體積比為1:0~0:1的石油醚和/或乙酸乙酯溶液梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經TLC監測，合并相同的部分；

E、高效液相色譜分離純化：將D步驟中7:3配比的石油醚-乙酸乙酯混合溶液進行洗脫得到的洗脫液以40~60%的甲醇為流動相，以規格為20mm×250mm、5μm的C₁₈制備柱為固定相，流速為20mL/min，紫外檢測器檢測波長為284nm，每次進樣200μL，收集洗脫液，多次累加后蒸干，即diphentherB。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于A步驟中所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基為馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L，pH值6.5，121℃，25min滅菌，冷卻至60℃倒斜面制備得到。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于A步驟中所述液體種子培養基為NaNO₃2g/L，K₂HPO₄ 1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，KCL 0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01g/L，葡萄糖20g/L，pH值6.5，裝入250mL錐形瓶，100mL/瓶，121℃，25min滅菌得到。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于A步驟中所述大米固體培養基為大米100g，珍珠巖20g，蒸餾水100mL，裝入600mL組培瓶，121℃，25min滅菌制備得到。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于B步驟中所述有機溶劑為體積濃度60~80%的丙酮、乙醇或甲醇。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于C步驟中所述浸膏在經硅膠柱層析前，還包括將浸膏用重量比1.5~3倍量的丙酮溶解，然后用浸膏重1~3倍的200~300目硅膠拌樣。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于C步驟中所述氯仿和/或丙酮溶液體積配比為1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于D步驟中所述石油醚和/或乙酸乙酯溶液體積配比為1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1。