[發(fā)明專利]表征微生物中抗生素抗性的方法和設(shè)備

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711066853.5
• 申請日: 2010-08-19
• 公開（公告）號: CN107881210A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: T·M·魯威德;J·J·A·范坎朋;A·F·范貝爾庫姆;W·H·F·格森斯;G·P·胡弗
• 申請（專利權(quán)）人: 伊拉斯謨大學(xué)鹿特丹醫(yī)藥中心
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/10;C12Q1/6872
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所11038
• 代理人: 羅菊華

1.一種用于表征微生物的抗生素抗性的方法，所述方法包括以下步驟：

a)提供抗微生物化合物的分子靶標(biāo)的參考質(zhì)譜；

b)使微生物、其細(xì)胞裂解物或其生長培養(yǎng)基上清液暴露于水成液中的所述抗微生物化合物，從而提供被暴露樣品；

c)獲取被暴露樣品的質(zhì)譜；

d)比較在c)步驟中獲取的質(zhì)譜和在a)步驟中的參考質(zhì)譜，以及

e)從所述比較中確定在所述暴露后是否出現(xiàn)所述分子靶標(biāo)的修飾，并在觀察到所述修飾時確立所述微生物潛在地對所述抗微生物化合物存在抗性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述修飾包括所述分子靶標(biāo)的甲基化或過量生成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述分子靶標(biāo)的過量生成是通過使用內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)、觀察分子靶標(biāo)與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)的比率增加而檢測的。

4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)是核酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述微生物是肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、大腸桿菌(Escherichia coli)、產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)和奇異變形桿菌(Proteus mirabilis)之一。

6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在步驟b)之后，所述被暴露樣品和基質(zhì)材料一同涂布在質(zhì)譜分析樣品載板上，其中所述樣品在樣品載板上干燥以制備質(zhì)譜樣品用于基質(zhì)輔助激光解析電離質(zhì)譜分析(MALDI-MS)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述質(zhì)譜是通過使用MALDI三重四極MS獲得的。

8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的被暴露樣品為所述微生物的被暴露于抗微生物化合物的粗細(xì)胞裂解物。

9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(b)中，通過在所述樣品中定量分析由所述微生物衍生的一種或多種結(jié)構(gòu)生物分子或代謝物來定量分析所述微生物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述結(jié)構(gòu)生物分子或代謝物為DNA分子。

11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述質(zhì)譜是通過使用MALDI三重四極質(zhì)譜分析、MALDI-TOF質(zhì)譜分析和MALDI-FT-ICR質(zhì)譜分析之一獲得的。

12.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述暴露的樣品是懷疑攜帶了微生物的人或動物受試者的體液或機體組織樣品。

13.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述抗微生物化合物是紅霉素、環(huán)丙沙星、萬古霉素、甲氧西林和四環(huán)素之一。

14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述分子靶標(biāo)的修飾是RNA甲基化。

15.一種被暴露樣品，其是通過在質(zhì)譜分析樣品載板上使微生物、其細(xì)胞裂解物或其生長培養(yǎng)基上清液暴露于水成液中的抗微生物化合物而制備的。