[發(fā)明專利]一種磷脂酰絲氨酸含量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711066602.7
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107688073B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖水水;張偉;王麗娜
• 申請（專利權(quán)）人: 威海百合生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 濟(jì)南日新專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37224
• 代理人: 李蕾蕾

本發(fā)明公開了一種磷脂酰絲氨酸含量的檢測方法，其解決現(xiàn)有檢測方法存在保留時間過長、峰形不佳的問題。其經(jīng)過以下步驟：（I）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取磷脂酰絲氨酸標(biāo)樣配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，隨后使用梯度洗脫條件進(jìn)行高效液相色譜分離；（II）將待測樣品制備成適合進(jìn)行高效液相色譜進(jìn)樣的液體樣品；（III）使用梯度洗脫高效液相色譜來分離待測樣品，所述的梯度洗脫條件和步驟I的梯度洗脫條件相同；（IV）隨后使用蒸發(fā)光散射檢測器記錄峰面積，并且按照步驟I得到的擬合方程來得到樣品中的磷脂酰絲氨酸濃度。本發(fā)明采用高效液相色譜配合蒸發(fā)光檢測器為該原料或成品的檢測提供了一個準(zhǔn)確快速、靈敏度高的檢測方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及利用吸附作用，例如色譜法將材料分離成各個組分來測試材料，尤其是一種在原料和成品中檢測磷脂酰絲氨酸含量的檢測方法。

背景技術(shù)

磷脂酰絲氨酸作為新食品原料，由于其獨特的健腦益智功效，逐漸被應(yīng)用到各類食品和保健品當(dāng)中，但檢測方法缺失，尚無國家、地方或行業(yè)等統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)對其含量的檢測方法進(jìn)行規(guī)定，這就導(dǎo)致在含磷脂酰絲氨酸的原料品質(zhì)控制和成品質(zhì)量控制方面無統(tǒng)一的依據(jù)。

目前，公開的磷脂酰絲氨酸的檢測方法有兩種，第一種是：2016年2月3日公開的申請?zhí)枮椋?01510874442.3的中國發(fā)明專利申請說明書中公開的“一種磷脂酰絲氨酸的高效液相色譜分析方法”；第一種是：2014年6月25日公開的申請?zhí)枮?01410145181.7的中國發(fā)明專利申請說明書中公開的“一種食品中磷脂酰絲氨酸含量的檢測方法”。這兩種公開的專利文獻(xiàn)中涉及的方法均是使用高效液相色譜結(jié)合蒸發(fā)光散射檢測器進(jìn)行含量檢測，上述公開文件中針對產(chǎn)品中的磷脂酰絲氨酸的含量不同，在樣品前處理階段存在差異，而在后續(xù)的檢測階段，儀器參數(shù)存在差異。但上述公開的檢測方法仍存在保留時間過長、峰形不佳、理論板數(shù)低等問題。因此，關(guān)于食品中磷脂酰絲氨酸的含量的檢測方法，尚不成熟，還需要建立一種色譜峰分離較好，具有準(zhǔn)確快速、高靈敏度、重現(xiàn)性好、回收率高的磷脂酰絲氨酸的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有檢測方法存在保留時間過長、峰形不佳的不足，本發(fā)明的目的是提供一種磷色譜峰分離較好、準(zhǔn)確快速、高靈敏度的脂酰絲氨酸含量的檢測方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：一種磷脂酰絲氨酸含量的檢測方法，其特征在于：其經(jīng)過以下步驟：

（I）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：準(zhǔn)確稱取磷脂酰絲氨酸標(biāo)樣，并且溶于氯仿/甲醇溶液，配置成標(biāo)準(zhǔn)溶液，隨后將4-10組梯度體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行高效液相色譜分離，所述的梯度洗脫條件是：高效液相色譜柱為球形硅膠正相柱；柱溫為30-40攝氏度；流動相A：正已烷、異丙醇、乙酸和三乙胺的體積比是810:160-200:8-12:0.6-0.10；流動相B：異丙醇、水、乙酸和三乙胺的體積比是860: 110-130:8-12:0.6-0.10；在0-10分鐘，流動相A和B的流速比為100:0；在10-15分鐘，流動相A和B的流速比為60:50-30；在15-20分鐘，流動相A和B的流速比為0:100；隨后使用蒸發(fā)光散射檢測器記錄峰面積，并且將峰面積對各組樣品的濃度做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合出一元一次方程，所述的氯仿/甲醇溶液的氯仿體積分?jǐn)?shù)為85-95%；

（II）將待測樣品制備成適合進(jìn)行高效液相色譜進(jìn)樣的液體樣品；

（III）使用梯度洗脫高效液相色譜來分離待測樣品，所述的梯度洗脫條件和步驟I的梯度洗脫條件相同；

（IV）隨后使用蒸發(fā)光散射檢測器記錄峰面積，并且按照步驟I得到的擬合方程來得到樣品中的磷脂酰絲氨酸濃度。