[發(fā)明專利]一種磷脂酰絲氨酸含量的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711066602.7
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107688073B
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖水水;張偉;王麗娜
• 申請（專利權(quán)）人: 威海百合生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 濟(jì)南日新專利代理事務(wù)所(普通合伙) 37224
• 代理人: 李蕾蕾

1.一種磷脂酰絲氨酸含量的檢測方法，其特征在于：其經(jīng)過以下步驟：

（I） 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取120mg標(biāo)樣磷脂酰絲氨酸，溶解于25mL的體積比為90/10的氯仿/甲醇的溶劑中配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，超聲使粉末充分溶解，置于4℃環(huán)境下保存，隨后以 10、15、20、25ul和30ul標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（II）試樣溶液配制

準(zhǔn)確的重復(fù)稱取市售的一定量的含磷脂酰絲氨酸的壓片糖果, 將壓片糖果先研磨至細(xì)粉狀態(tài)后加入到50ml的容量瓶中，加入10ml的體積比為90/10的氯仿/甲醇溶液，渦旋振蕩分散均勻后，超聲5min，冷卻至室溫,用氯仿/甲醇溶液補(bǔ)足至50mL，搖勻，配制成樣品液，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾，進(jìn)樣；

（III）進(jìn)樣檢測

將標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液在如下特定色譜條件下進(jìn)行測定：色譜柱：LiChrosphere 100diol：4mm×125mm；流動相：流動相A為正已烷-異丙醇-乙酸-三乙胺的體積比是810:180:10:0.8，流動相B為異丙醇-水-乙酸-三乙胺的體積比是860:130:10:0.8；梯度洗脫條件如下表：

步驟	運(yùn)行時間，min	流動相A，%	流動相B，%
1	0	100	0
2	10	60	40
3	15	0	100
4	20	100	0

流速：1.2mL/min；柱溫：37℃；進(jìn)樣量：5μL；檢測器參數(shù)：2000型蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度95℃，載氣流速3.0L/min；在洗脫過程中樣品的保留時間跟標(biāo)準(zhǔn)樣品相比作定性分析；

（IV）磷脂酰絲氨酸的含量計算

以標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積做對數(shù)后為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度做對數(shù)后為橫坐標(biāo)，繪制雙對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)峰面積從雙對數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣品溶液濃度，進(jìn)行定量分析，通過測出的樣品的響應(yīng)值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出最終磷脂酰絲氨酸的濃度。