[發(fā)明專利]一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711066599.9
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107703080A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李磊;李艷;張偉;王麗娜
• 申請（專利權(quán)）人: 威海百合生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/38;G01N1/34
• 代理公司: 濟(jì)南日新專利代理事務(wù)所37224
• 代理人: 李蕾蕾

1.一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其特征在于：其經(jīng)過以下步驟：

（I）配制蘆丁對照品：將蘆丁對照品減壓干燥至恒重，稱取干燥后的對照品并且溶解于70%乙醇，制成100-300 mg/1000mL的對照品溶液；

（II）配制樣品溶液：精密稱取適量樣品70%乙醇，超聲提取并且搖勻過濾；

（III）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密吸取對照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml，搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，以mg/ml為單位的濃度為橫縱標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（IV）樣品測定：精密吸取樣品續(xù)濾液0.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml,搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中蘆丁的濃度；

（V）按照下式來計算總黃酮含量：

總黃酮含量（%）=，

式中，C：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的樣品溶液中蘆丁的濃度，單位為mg/ml；W：樣品的稱樣量，單位為mg。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其特征在于：其經(jīng)過以下步驟：

（I）配制蘆丁對照品：將蘆丁對照品于102℃減壓干燥至恒重，稱取干燥后的對照品20mg左右于100ml量瓶中，加70%乙醇溶解定溶；

（II）配制樣品溶液：精密稱取適量樣品于50ml的量瓶中，加入40ml 包含70%乙醇的提取液，超聲提取30min，冷卻至室溫，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻過濾；

（III）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密吸取對照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml，搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，以mg/ml為單位的濃度為橫縱標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（IV）樣品測定：精密吸取樣品續(xù)濾液1ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml，搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中蘆丁的濃度；

（V）按照下式來計算總黃酮含量：

總黃酮含量（%）=，

式中，C：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的樣品溶液中蘆丁的濃度，單位為mg/ml；W：樣品的稱樣量，單位為mg。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其特征在于：所述的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液按照以下的方法配制：準(zhǔn)確稱取醋酸鈉1.8g,加醋酸0.98ml,加水溶解定容至100ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其特征在于：在步驟II中，所述的提取液由質(zhì)量分?jǐn)?shù)70%的乙醇、10%的丙酮和20%的水所組成。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其特征在于：在步驟II中，所述的超聲提取在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其特征在于：在步驟III和步驟IV中，在加70%乙醇溶液到刻度之前，還包括步驟：將所得到的溶液吸入試管中，并且使用干燥的氮?dú)夤呐?0-60s，隨后加入乙醇溶液定容，并且進(jìn)行分光光度測量。