[發明專利]一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法

在審

• 申請號: 201711066599.9
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107703080A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發明（設計）人: 李磊;李艷;張偉;王麗娜
• 申請（專利權）人: 威海百合生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/38;G01N1/34
• 代理公司: 濟南日新專利代理事務所37224
• 代理人: 李蕾蕾

技術領域

本發明涉及利用光學手段來測試材料，尤其是一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法。

背景技術

蒲公英屬菊科多年生草本植物，含有多種活性成分，如蒲公英甾醇、蒲公英苦素、黃酮類、咖啡酸、綠原酸和多糖等。其中，總黃酮為黃酮醇類，主要結構為5-OH黃酮與2-OH查耳酮，對宛式擬青霉菌和枯草桿菌具有良好的抑菌作用，并具有重要的抗氧化作用，能有效清除超氧陰離子自由基、抗炎、提高機體免疫力、抗自由基、抗氧化、抗病毒等作用。蒲公英提取物為蒲公英經過提取分離，濃縮其總黃酮有效成分，因此總黃酮含量的測定為評價提取物好壞的重要指標，也是以蒲公英為原料的保健品與藥品中評價其功效的重要指標。

目前，公開報道的總黃酮的測定方法主要為分光光度計法與薄層色譜掃描法。其中，分光光度計法最為普遍。目前國標與《保健食品檢驗與評價技術規范》中總黃酮的測定方法并不適用于蒲公英黃酮的測定。現發表的用分光光度計法原理為利用三價鋁離子作為顯色劑，樣品的處理方式主要分為兩種：一種前處理用石油醚回流提取1h,甲醇提取2.5h后分別加入亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉溶液。此方法前處理時間過長，步驟繁瑣，試劑對人體有損害。另一種方法前處理用60%乙醇加熱溶解，后面所用試劑仍然相同，雖縮短了時長，但試劑仍然對人體有毒。總之，目前報道的分光光度計法仍然存在步驟繁瑣、耗時長、試劑有毒等不足。薄層色譜法因對儀器要求高、應用不普遍。

發明內容

為了克服現有分光光度計法存在步驟繁瑣、耗時長、試劑有毒以及薄層色譜法對儀器要求高、應用不普遍的不足，本發明的目的在于提供一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，該測定方法采用分光光度計法，原理為利用母核中含有的堿性氧原子，與鋁離子產生黃色絡合物，以蘆丁為對照品，三氯化鋁作為顯色劑在波長270nm處比色。所用試劑有無水乙醇、醋酸、醋酸鈉 、三氯化鋁，均對人體無害，而且方法簡單可行，無加熱與回流步驟，適用于蒲公英提取物原料、保健品、藥品中蒲公英總黃酮的檢測。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其特征在于：其經過以下步驟：

（I）配制蘆丁對照品：將蘆丁對照品減壓干燥至恒重，稱取干燥后的對照品并且溶解于70%乙醇，制成100-300 mg/1000mL的對照品溶液；

（II）配制樣品溶液：精密稱取適量樣品70%乙醇，超聲提取并且搖勻過濾；

（III）繪制標準曲線：精密吸取對照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml，搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，以mg/ml為單位的濃度為橫縱標，吸光度為縱坐標做標準曲線；

（IV）樣品測定：精密吸取樣品續濾液0.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml,搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，從標準曲線上讀出樣品溶液中蘆丁的濃度；

（V）按照下式來計算總黃酮含量：

總黃酮含量（%）=，

式中，C：從標準曲線上讀出的樣品溶液中蘆丁的濃度，單位為mg/ml；W：樣品的稱樣量，單位為mg。

在本發明優選的方面，一種蒲公英提取物總黃酮含量的測定方法，其經過以下步驟：

（I）配制蘆丁對照品：將蘆丁對照品于102℃減壓干燥至恒重，稱取干燥后的對照品20mg左右于100ml量瓶中，加70%乙醇溶解定溶；

（II）配制樣品溶液：精密稱取適量樣品于50ml的量瓶中，加入40ml 包含70%乙醇的提取液，超聲提取30min，冷卻至室溫，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻過濾；

（III）繪制標準曲線：精密吸取對照品溶液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml，搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，以mg/ml為單位的濃度為橫縱標，吸光度為縱坐標做標準曲線；

（IV）樣品測定：精密吸取樣品續濾液1ml于10ml的量瓶中，加入醋酸-醋酸鈉緩沖液2.0ml，0.1mol/L三氯化鋁2.0ml，搖勻加70%乙醇溶液稀釋至刻度，在270nm處以試劑為空白測定吸光度，從標準曲線上讀出樣品溶液中蘆丁的濃度；

（V）按照下式來計算總黃酮含量：

總黃酮含量（%）=，