[發明專利]一種人神經干細胞培養基及應用

有效

• 申請號: 201711065847.8
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107663516B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 王娟;馬靜;辛文
• 申請（專利權）人: 北京全式金生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發明公開一種人神經干細胞培養基，所述培養基包括以下組分：基礎培養基、營養添加劑、生長因子和信號通路調控小分子。本發明還公開了上述培養基在培養人神經干細胞的應用。本發明培養基配方簡單，成本低廉，化學成分明確，不含動物源性成分，不含蛋白提取物和水解物，批次之間均一穩定，沒有潛在引入動物源性和人源性病原微生物的風險，更加安全，可以應用在臨床研究和臨床實驗人神經干細胞的培養中；另外，本發明首次將信號通路調控小分子應用到了人神經干細胞的培養中，在信號通路調控小分子的作用下，可以長期支持各種來源的人神經干細胞的快速增殖和干性的維持，成功解決了人神經干細胞在體外培養易分化和難以長期擴增的技術問題。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域。更具體地，涉及一種人神經干細胞培養基及應用。

背景技術

各種神經損傷和退行性的神經系統疾病的發病率呈逐年上升趨勢，傳統的醫學方法很難徹底治愈這類疾病，細胞替代性治療是徹底治愈這類疾病潛在的最有效的手段。

神經干細胞具有自我復制能力和分化為神經前體細胞、神經元、星形膠質細胞和少突角質細胞等細胞類型的潛能，是疾病發病機制研究、藥物篩選等的重要工具，也是神經退行性和損傷類疾病細胞替代性治療的理想種子資源細胞。目前，已經有許多途徑可以在體外獲得神經干細胞，如從腦組織內原代分離培養獲得，多能性干細胞誘導分化獲得，體細胞轉分化獲得。

神經干細胞培養液一般由基礎培養基、營養添加劑和生長因子組成，如專利CN103045538A、專利CN105296429A和專利CN1536073A。基礎培養基負責提供細胞生長必須的無機鹽、維生素、氨基酸、葡萄糖、有機物等物質，目前培養神經干細胞常用的基礎培養基一般是商品化的DMEM/F12medium和Neurobasal medium。營養添加劑負責提供細胞生長必須的蛋白、激素、微量元素等成分，商售的N2和B27是比較常用的神經干細胞培養添。N2成分簡單，只含有胰島素、轉鐵蛋白、孕酮、腐胺和硒酸鈉五種成分，批次之間均一性比較好控制，但是由于缺乏一些細胞生長需求物，不能長期支持神經干細胞的生長。B27在支持神經干細胞生長方面效果較好，但是其成分復雜，含有動物提取蛋白-牛血清白蛋白，不僅批次之間穩定性難以控制，還會有潛在引入動物源性病原微生物的風險，為細胞替代性治療帶來了潛在的安全隱患。生長因子負責調控相關的信號通路來維持細胞的自我更新能力，目前培養神經干細胞常用的生長因子是堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和上皮細胞生長因子(EGF)。但是人神經干細胞在目前已有的培養基中增殖能力有限，自發分化比較嚴重。

因此，需要提供一種新型的人神經干細胞培養基，以解決上述問題。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種人神經干細胞培養基，該培養基配方簡單、成本低廉、化學成分明確，不含動物源性成分，不含蛋白提取物和水解物。

本發明的目的之二在于提供上述人神經干細胞培養基在培養人神經干細胞的應用。

為達到上述目的，本發明采用下述技術方案：

本發明提供了一種人神經干細胞培養基，所述培養基包括以下組分：基礎培養基、營養添加劑、生長因子和信號通路調控小分子；

進一步，所述生長因子包括堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和上皮細胞生長因子(EGF)，二者的最終使用濃度均為5-100ng/mL，優選的為6-50ng/mL，最優選的為10-30ng/mL。

所述信號通路調控小分子為Wnt信號通路激活劑、凋亡抑制小分子、p53信號通路抑制劑中的一種或幾種組合；優選的，為Wnt信號通路激活劑和p53信號通路抑制劑一種或兩種組合。

其中，