[發(fā)明專利]一種人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711065847.8
• 申請(qǐng)日: 2017-11-02
• 公開（公告）號(hào): CN107663516B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王娟;馬靜;辛文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京全式金生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0797
• 分類號(hào): C12N5/0797
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

1.一種人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括以下組分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)添加劑、生長(zhǎng)因子和信號(hào)通路調(diào)控小分子，其中，

所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM/F12 medium、Neurobasal medium中的一種或兩種；

所述營(yíng)養(yǎng)添加劑組成成分和最終使用濃度分別為：人胰島素0.1-20mg/L、維生素C10-200mg/L、谷胱甘肽10-100mg/L、亞麻酸0.05-5mg/L、肉毒堿0.2-20mg/L、N-乙酰半胱氨酸5-500μM、乙醇胺0.01-10mg/L、亞油酸0.05-5mg/L；

所述生長(zhǎng)因子包括堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，二者的最終使用濃度均為5-100ng/mL；

所述信號(hào)通路調(diào)控小分子為Wnt信號(hào)通路激活劑和p53信號(hào)通路抑制劑；其中，所述Wnt信號(hào)通路激活劑及最終使用濃度為WNT3a，1-100ng/mL；6-BIO，1-20μM；CHIR-98014，0.1-20μM；TDZD-8，10-100μM；AZD1080，0.1-50μM；CHIR99021，0.1-20μM中的一種或者幾種的組合；所述p53信號(hào)通路抑制劑及最終使用濃度為Pifithrin-αhydrobromide，0.1-100μM；CyclicPifithrin-αhydrobromide，0.1-100μM；Pifithrin-μ，0.1-100μM；SJ 172550，0.5-500μM中的一種或幾種的組合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述生長(zhǎng)因子包括堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，二者的最終使用濃度均為6-50ng/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述生長(zhǎng)因子包括堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，二者的最終使用濃度均為10-30ng/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述Wnt信號(hào)通路激活劑及最終使用濃度為WNT3a，1-100ng/mL或6-BIO，1-20μM；所述p53信號(hào)通路抑制劑及最終使用濃度為Cyclic Pifithrin-αhydrobromide，0.1-100μM或Pifithrin-αhydrobromide，0.1-100μM。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述Wnt信號(hào)通路激活劑及最終使用濃度為6-BIO，1-20μM；所述p53信號(hào)通路抑制劑及最終使用濃度為Pifithrin-αhydrobromide，0.1-100μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述信號(hào)通路調(diào)控小分子還包括凋亡抑制小分子。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述凋亡抑制小分子及最終使用濃度為Bax inhibitor peptide V5，0.1-100μM；iMAC2，0.01-100μM；Embelin，0.5-500μM中的一種或幾種的組合。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述凋亡抑制小分子及最終使用濃度為Bax inhibitor peptide V5,0.1-100μM和iMAC2，0.01-100μM中的一種或兩種的組合。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述凋亡抑制小分子及最終使用濃度為Bax inhibitor peptide V5,0.1-100μM。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為體積比為1:1的DMEM/F12 medium和Neurobasal medium混合培養(yǎng)基。