[發(fā)明專利]一種蟲草花多糖的提取方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711065338.5
• 申請(qǐng)日: 2017-11-02
• 公開（公告）號(hào): CN109748979A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張松林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 張松林
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種蟲草花多糖的提取方法，其特征在于，所述的提取方法按如下步驟進(jìn)行：

(1)粉碎：將干燥的蟲草花進(jìn)行粉碎并過(guò)篩，得到蟲草花粉末；

(2)水提：將步驟(1)所得蟲草花粉末與蒸餾水以料液質(zhì)量比1：20～80混合，加熱煮沸2～3h，并輔以超聲波輔助提取，之后離心10～15min，取上清液，離心所得殘?jiān)貜?fù)水提3～4次，合并各次所得上清液，濃縮至原體積的1/4～1/10，得到多糖提取液；

(3)一次醇沉：溫度4～25℃下，將步驟(2)所得多糖提取液與食用酒精以體積比1：1.5～4混合，進(jìn)行醇沉24～30h，沉淀析出，離心10～15min，取離心所得固體物質(zhì)重復(fù)醇沉2～3次，得到粗多糖；

(4)酶解：將步驟(3)所得粗多糖溶于30～40質(zhì)量倍的蒸餾水中，用Na2CO3水溶液調(diào)節(jié)pH值為7.2～7.8，得到粗多糖溶液，加入胰蛋白酶、甲苯，在35～37℃下恒溫水解18～24h，之后濃縮至原體積的1/4～1/2，得到蛋白酶解液；

所述胰蛋白酶的活性為8000～10000U/g；所述胰蛋白酶的加入量為0.05～0.1g/1g粗多糖；所述甲苯的體積用量為2.5～3.5mL/1g粗多糖；

(5)脫蛋白：將步驟(4)所得蛋白酶解液與Sevag試劑以體積比1：2.5～3混合，常溫抽提1～3h，之后離心10～15min，取上清液，將該上清液重復(fù)脫蛋白2～3次，之后濃縮至原體積的1/4～1/3，得到脫蛋白多糖液；

所述的Sevag試劑為氯仿和正丁醇以體積比4：1配制而成的混合液；

(6)二次醇沉：溫度4～25℃下，將步驟(5)所得脫蛋白多糖液與食用酒精以體積比1：1.5～4.5混合，進(jìn)行醇沉24～30h，沉淀析出，離心10～15min，取離心所得固體物質(zhì)室溫晾干，得到多糖粗產(chǎn)物；

(7)超濾、柱層析：將步驟(6)所得多糖粗產(chǎn)物用30～40質(zhì)量倍的蒸餾水溶解，再用超濾膜進(jìn)行超濾，收集分子量10000道爾頓以上的組分，于常溫下進(jìn)行SephadexG-100柱層析純化，洗脫劑為重蒸水，收集含多糖的洗脫液，冷凍干燥，得到蟲草花多糖。

2.如權(quán)利要求1所述的蟲草花多糖的提取方法，其特征在于，步驟(1)中，所述過(guò)篩的篩孔為80～120目。

3.如權(quán)利要求1所述的蟲草花多糖的提取方法，其特征在于，步驟(2)中，所述超聲波的功率為500W，頻率為20KHz。

4.如權(quán)利要求1所述的蟲草花多糖的提取方法，其特征在于，步驟(3)中，所述離心所得固體物質(zhì)重復(fù)醇沉的方法為：將固體物質(zhì)用30～40質(zhì)量倍的水溶解，得到溶解液，再將所得溶解液與食用酒精以體積比1：1.5～4混合，進(jìn)行醇沉24～30h，沉淀析出，離心10～15min得到固體物質(zhì)，如此重復(fù)醇沉2～3次，得到粗多糖。

5.如權(quán)利要求1所述的蟲草花多糖的提取方法，其特征在于，步驟(4)中，所述Na2CO3水溶液的濃度為0.1～0.2mol/L。

6.如權(quán)利要求1所述的蟲草花多糖的提取方法，其特征在于，步驟(2)、(3)、(5)或(6)中，所述離心的速率為8000～10000rpm。

7.如權(quán)利要求1所述的蟲草花多糖的提取方法，其特征在于，步驟(2)、(4)或(5)中，所述的濃縮采用60～80℃下旋蒸的方式濃縮。