[發(fā)明專利]4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711062812.9
• 申請(qǐng)日: 2017-11-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107746382B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱坤福;薛飛;朱曉肸
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東朱氏堂醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號(hào): C07D209/08
• 分類號(hào): C07D209/08;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 濟(jì)南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所 37218
• 代理人: 張貴賓

本發(fā)明公開(kāi)了通式(Ｉ)所示的4?丹磺酰胺?吲哚類熒光探針及其制備方法與應(yīng)用，該熒光探針的結(jié)構(gòu)是在4?丹磺酰胺?吲哚母核的基礎(chǔ)上連接一個(gè)烴基鏈而成。由于丹磺酰胺的存在，這類化合物具有熒光特性；由于烴基取代吲哚環(huán)的存在，該類化合物可以快速滲透到活的腫瘤細(xì)胞中，并且形成特征鮮明的細(xì)胞質(zhì)染色而細(xì)胞核不染色的熒光圖像；但是對(duì)于死亡的腫瘤細(xì)胞，該類化合物則表現(xiàn)為完全不同于活細(xì)胞的熒光染色特征，因此可以用于生物醫(yī)學(xué)相關(guān)行業(yè)中腫瘤細(xì)胞活性的檢測(cè)。(Ｉ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

活細(xì)胞由于其本身存活的需求，細(xì)胞通過(guò)完整的細(xì)胞膜與外界進(jìn)行隔離，從而形成細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定的生理環(huán)境，包括：pH值、營(yíng)養(yǎng)成分、各種物質(zhì)成分比。當(dāng)細(xì)胞死亡的時(shí)候，盡管細(xì)胞死亡可以通過(guò)不同的方式，如凋亡、壞死和自噬等，而每種死亡形式都有特殊的信號(hào)通路啟動(dòng)和調(diào)控，但是細(xì)胞死亡過(guò)程都涉及到細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的變化，并且都要經(jīng)歷一個(gè)形態(tài)學(xué)的變化。總的來(lái)說(shuō)，細(xì)胞死亡時(shí)形態(tài)變化主要包括細(xì)胞形狀改變、細(xì)胞基質(zhì)變得緊密、細(xì)胞核收縮和細(xì)胞膜破裂等。

區(qū)分腫瘤活細(xì)胞與死細(xì)胞的生物醫(yī)學(xué)意義非常重要。對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究中，如何快速準(zhǔn)確的檢測(cè)出活細(xì)胞與死細(xì)胞對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究具有重要的意義。例如，在藥理評(píng)價(jià)中，簡(jiǎn)單而準(zhǔn)確的檢測(cè)細(xì)胞是死的還是活的十分重要。同時(shí)，在進(jìn)行臨床病理篩查中，如果能夠快速的區(qū)分的腫瘤細(xì)胞是否是死亡或者活得也非常的重要。一個(gè)好的區(qū)分死亡細(xì)胞或活細(xì)胞的方法應(yīng)該是經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、快速、靈敏、精確和具有普適性。目前市場(chǎng)上的細(xì)胞活性的檢測(cè)方法都不能滿足上述所有要求。

根據(jù)檢測(cè)的原理，細(xì)胞活性的檢測(cè)方法主要可以分為兩大類，其一為基于細(xì)胞活性(生化酶學(xué)活性)的分析檢測(cè)，比如MTT和Alamarblue等。這類方法目前應(yīng)用比較廣泛，但具有一定的局限性。這類檢測(cè)細(xì)胞活性的方法可能會(huì)受到篩選化學(xué)試劑的影響。例如，MTT化合物的環(huán)狀結(jié)構(gòu)可以被具有還原活性的化合物給打開(kāi)，造成檢測(cè)的假陽(yáng)性；另外有些生化檢測(cè)方法僅局限于檢測(cè)某種特定的細(xì)胞死亡方式，如檢測(cè)Caspase-3的活性來(lái)確定細(xì)胞凋亡情況?？偟膩?lái)說(shuō)，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的活性來(lái)篩查腫瘤細(xì)胞的死活，這種方法也不是很敏感，對(duì)于含有少量的腫瘤細(xì)胞不適用。

第二種為基于細(xì)胞形態(tài)變化的分析檢測(cè)。形態(tài)學(xué)鑒定被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞死亡。光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化是最簡(jiǎn)單和精確的活細(xì)胞與死細(xì)胞的鑒定方法。細(xì)胞形態(tài)的變化標(biāo)志著細(xì)胞死亡的啟動(dòng)。在科學(xué)研究的早期，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)和定義細(xì)胞死亡主要是通過(guò)在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。而直到現(xiàn)在，通過(guò)形態(tài)變化鑒定細(xì)胞死亡是定義細(xì)胞死亡的一個(gè)金標(biāo)準(zhǔn)。但是這種方法具有很大的局限性，這主要體現(xiàn)在，在可見(jiàn)光下，細(xì)胞通常處于一個(gè)透明的顏色，同時(shí)很難于周圍的結(jié)締組織或者組織培養(yǎng)液進(jìn)行區(qū)分。對(duì)于活細(xì)胞的活體檢測(cè)，這就尤其困難。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針及其制備方法與應(yīng)用，具有低細(xì)胞毒性并較快穿透活細(xì)胞的細(xì)胞膜，特異性地對(duì)活細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行熒光染色的特點(diǎn)。相比較，這類化合物對(duì)于死亡細(xì)胞的染色則在熒光形態(tài)上明顯不同于活細(xì)胞的染色，從而能夠用于細(xì)胞活性的檢測(cè)。

本發(fā)明提供了通式(Ｉ)所示的4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針。

其中，R選自甲基、乙基、丙基、丁基和戊基。

本發(fā)明涉及的一部分4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針的名稱和結(jié)構(gòu)式列在表Ⅰ中。

本發(fā)明還提供通式I所示4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針的制備方法：