[發明專利]4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201711062812.9
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107746382B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 朱坤福;薛飛;朱曉肸
• 申請（專利權）人: 山東朱氏堂醫療器械有限公司
• 主分類號: C07D209/08
• 分類號: C07D209/08;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

1.4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針，特征在于，化學式如式Ｉ所示：

（Ｉ）；

式中，R為甲基、乙基、丙基、丁基和戊基中的任一種；

該熒光探針能夠檢測區分腫瘤細胞中的活細胞、細胞膜完整的死細胞、細胞膜破裂的死細胞及細胞碎片；

對于活細胞染色結果為，細胞核沒有熒光，細胞質特異性的熒光染色；對于細胞膜完整的死細胞，表現為全細胞熒光分布；對于細胞膜破裂的死細胞及細胞碎片，表現為無熒光染色。

2.一種權利要求1所述的4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針的制備方法，特征在于，步驟如下：稱取丹磺酰氯溶解于吡啶，稱取4-氨基-吲哚溶解于吡啶，緩慢滴入丹磺酰氯溶液，冰浴下攪拌2小時至室溫，氬氣保護，反應過夜；向反應中加入雙蒸水終止反應，且沉淀反應混合物；采用乙酸乙酯溶解析出的固體，分別用碳酸氫鈉洗滌兩次，飽和氯化鈉洗兩次，水洗兩次；加入硫酸鈉去除水，經過柱層析得到中間體1；將中間體1與氫化鈉溶解于溶劑二甲基甲酰胺中，氬氣保護下冰浴反應30分鐘；逐滴加入各種烷基化試劑，室溫反應過夜；向反應體系中加入二氯甲烷至反應物完全溶解，加入飽和氯化鈉洗三次，水洗兩次，加入硫酸鈉除水，反應混合物通過柱層析進行分離純化。

3.一種權利要求1 所述的4-丹磺酰胺-吲哚類熒光探針在生物學中檢測區分活的或死的腫瘤細胞的方法，特征在于：首先，向需要檢測的細胞樣品中加入50微摩爾/升的熒光染料共同孵育10分鐘；其次，進行沒有結合染料的洗脫，由于培養的腫瘤細胞附著在培養板上，通過洗脫漂洗掉未結合的染料；最后，用熒光顯微鏡，對于熒光染料采用紫外光激發，對腫瘤細胞進行直接的觀察；對于活細胞染色結果為：細胞核沒有熒光，細胞質特異性的熒光染色；對于細胞膜完整的死細胞，表現為全細胞熒光分布；對于細胞膜破裂的死細胞及細胞碎片，表現為無熒光染色。