[發明專利]具有抑制腫瘤進程活性的融合蛋白BTN3A3-Ig及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201711062323.3
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN109748967B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 唐麗;柳迪;賀福初;陸倩
• 申請（專利權）人: 北京蛋白質組研究中心;中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.具有抑制腫瘤進程活性的融合蛋白，命名為BTN3A3-Ig，是將人BTN3A3與人IgG1通過連接肽連接后獲得的重組蛋白，其氨基酸殘基序列如序列表中的序列1所示；所述腫瘤為腫瘤相關巨噬細胞表達LSECtin且腫瘤細胞表達BTN3A3的腫瘤。

2.編碼權利要求1所述的融合蛋白BTN3A3-Ig的基因，命名為融合基因BTN3A3-Ig。

3.根據權利要求2所述的基因，其特征在于：是編碼序列表中序列1的DNA序列。

4.根據權利要求2所述的基因，其特征在于：是序列表中序列2的DNA序列。

5.含有權利要求2-4中任一項所述融合基因BTN3A3-Ig的表達載體、轉基因細胞系或宿主菌。

6.一種表達權利要求1所述融合蛋白BTN3A3-Ig的方法，包括以下步驟：

1）構建重組表達載體：將權利要求2-4中任一項提及的融合基因BTN3A3-Ig連接入表達載體中，得到含有融合基因BTN3A3-Ig的重組表達載體；

2）表達融合蛋白BTN3A3-Ig：將含有融合基因BTN3A3-Ig的重組表達載體pIRES2-EGFP-BTN3A3-Ig轉化或轉染宿主細胞及其后代細胞，培養重組宿主細胞，使融合基因BTN3A3-Ig獲得表達；

3）純化：對重組表達蛋白進行純化，得到融合蛋白BTN3A3-Ig。

7.根據權利要求6所述的表達方法，其特征在于：所述步驟1）中將融合基因BTN3A3-Ig連接入載體pIRES2-EGFP中的NheⅠ和SalⅠ酶切位點之間，得到重組表達載體，命名為pIRES2-EGFP-BTN3A3-Ig。

8.根據權利要求6所述的表達方法，其特征在于：所述步驟2）中的宿主細胞為可表達外源基因的細胞；所述步驟2）中培養含有融合基因BTN3A3-Ig的重組宿主細胞的培養基為適于宿主細胞生長的培養基；所述步驟2）中含有融合基因BTN3A3-Ig的重組宿主細胞的培養條件為適于宿主細胞生長的培養條件：36.5-37.5℃培養24-120小時。

9.根據權利要求8所述的表達方法，其特征在于：所述可表達外源基因的細胞包括293T細胞、293細胞和CHO-S細胞。

10.根據權利要求8所述的表達方法，其特征在于：所述適于宿主細胞生長的培養基為無血清培養基M293TI、CD CHO或CD OptiCHO?。

11.根據權利要求8所述的表達方法，其特征在于：所述培養條件為37℃培養96小時。

12.根據權利要求6所述的表達方法，其特征在于：所述步驟3）中使用Protein GSepharose柱、Protein A/G Sepharose柱、或Protein A Sepharose柱對重組表達蛋白進行純化。