[發(fā)明專利]雜交瘤細(xì)胞株及其分泌的具有抑制腫瘤進(jìn)程活性的單克隆抗體與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711062233.4
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN109750002B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐麗;柳迪;賀福初;陸倩
• 申請（專利權(quán)）人: 北京蛋白質(zhì)組研究中心;中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;C07K19/00;C12N15/62;A61K39/00;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京尚誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

本發(fā)明公開了一種具有抑制腫瘤進(jìn)程活性的單克隆抗體5E08和分泌該抗體的小鼠抗人單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株Anti?P3(5E08)20170921 CGMCC No.14723，該雜交瘤細(xì)胞株是以人BTN3A3與小鼠IgG2a的融合蛋白BTN3A3?mIg為免疫原免疫小鼠獲得，其分泌的單克隆抗體5E08能夠阻斷LSECtin與BTN3A3之間的相互作用，從而抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。本發(fā)明的單克隆抗體5E08可用于制備抗腫瘤藥物，為腫瘤的免疫蛋白治療提供了一個新思路。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域中的雜交瘤細(xì)胞株及其分泌的單克隆抗體與應(yīng)用，特別是涉及具有抑制腫瘤進(jìn)程活性的單克隆抗體和分泌該抗體的雜交瘤細(xì)胞株以及該單克隆抗體在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

全球腫瘤發(fā)病率自20世紀(jì)70年代末開始一直呈上升趨勢。目前，對于腫瘤的治療手段主要包括手術(shù)、放療、化療、內(nèi)分泌治療、靶向治療及中醫(yī)藥輔助治療等。困擾腫瘤治療的根本原因是腫瘤具備一定的耐藥性及復(fù)發(fā)能力。研究表明，導(dǎo)致腫瘤具有耐藥性以及復(fù)發(fā)能力的根本原因在于腫瘤細(xì)胞干性的維持與提升，因此，腫瘤細(xì)胞干性的靶向性治療日益成為研究的熱點。腫瘤細(xì)胞的干性受基因多樣性、表觀遺傳以及腫瘤微環(huán)境三個因素調(diào)控。鑒于腫瘤微環(huán)境因素促進(jìn)腫瘤細(xì)胞干性依賴細(xì)胞間交互作用，因此，認(rèn)識并挖掘促進(jìn)腫瘤細(xì)胞干性的膜蛋白相互作用分子對，篩選抑制該類膜蛋白間相互作用的物質(zhì)，有望為腫瘤細(xì)胞干性的靶向性治療提供新思路。

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境中存在的巨噬細(xì)胞的總稱，是腫瘤微環(huán)境中浸潤免疫細(xì)胞的重要組成部分。已有研究顯示，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞能夠通過多種途徑促進(jìn)腫瘤進(jìn)程，包括抑制腫瘤免疫反應(yīng)、促進(jìn)腫瘤免疫耐受環(huán)境的形成、促進(jìn)腫瘤組織血管生成等。鑒于腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤進(jìn)程現(xiàn)象明確，清除腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、促使腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞向免疫激活方向轉(zhuǎn)化已成為潛在的腫瘤治療方法。

LSECtin(Liver Sinusoidal Endothelial Cells lectin)是Ⅱ型跨膜糖蛋白，位于人類19p13.3，是C型凝集素家族的新成員。已知LSECtin蛋白功能包括在黑色素瘤中負(fù)調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫反應(yīng)，促進(jìn)埃博拉病毒引發(fā)的炎性反應(yīng)，抑制CTL依賴的HBV 病毒清除，促進(jìn)結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移，發(fā)明人賀福初、唐麗等之前發(fā)現(xiàn)LSECtin可能作為黑色素瘤免疫治療的靶點(CN104906575A，2014100898325)；治療和/或預(yù)防埃博拉病毒的靶點(CN107019703A，2016100731468)；抗丙型肝炎病毒感染藥物作用靶點(CN101152558，2007101755278)；還發(fā)現(xiàn)LSECtin或含有LSECtin的融合蛋白可應(yīng)用于制備抑制癌細(xì)胞向肝轉(zhuǎn)移的藥物，LSECtin蛋白及其融合蛋白能粘附結(jié)腸癌細(xì)胞、抑制結(jié)腸癌細(xì)胞往肝臟的歸巢性遷移，成為抗粘附治療腫瘤肝轉(zhuǎn)移的一個新靶標(biāo)(CN101732715A，2008102257147)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供能夠阻斷LSECtin與BTN3A3之間相互作用的物質(zhì)，從而抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展(抑制腫瘤進(jìn)程)。該物質(zhì)為能夠阻斷LSECtin與BTN3A3之間的相互作用，具有抑制腫瘤進(jìn)程活性的單克隆抗體。

為得到所述具有抑制腫瘤進(jìn)程活性的單克隆抗體，本發(fā)明首先提出用于制備該抗體的免疫原，其為一種特別設(shè)計的融合蛋白，命名為BTN3A3-mIg，是將人BTN3A3與小鼠IgG2a通過連接肽連接后獲得的重組蛋白。

具體來講，所述融合蛋白BTN3A3-mIg是下述氨基酸殘基序列之一：

1)序列表中的序列1；

2)將序列表中序列1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有抗BTN3A3免疫原性的蛋白質(zhì)；

3)將序列表中序列1的氨基酸殘基序列經(jīng)過氨基酸殘基的取代、缺失或添加且具有抗BTN3A3免疫原性的蛋白質(zhì)，新蛋白質(zhì)與序列1同源性達(dá)到80％或更高。