[發明專利]一種用于檢測寨卡病毒的引物組、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201711060510.8
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107574265A
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 張薇;夏雪山;王耕;宋玉竹;王振超;馮悅
• 申請（專利權）人: 張薇
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司11471
• 代理人: 王金寶

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種用于檢測寨卡病毒的環介導等溫擴增熒光引物組、試劑盒及檢測方法。

背景技術

寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)于1947年首次在烏干達從恒河猴體內被發現，1953年在烏干達和坦桑尼亞的人體中分離到病毒。ZIKV通過受到感染的伊蚊屬蚊蟲叮咬傳播到人，這主要涉及熱帶地區的埃及伊蚊。它與傳播登革熱、基孔肯雅熱和黃熱病的蚊蟲相同。然而，已有兩例寨卡病毒通過性傳播的病例，在另一例病例中發現精液中存在寨卡病毒。

近年來ZIKV感染病例和爆發疫情的國家及地區增加明顯，2007年首次在太平洋島國密克羅尼西亞的雅浦島出現寨卡病毒暴發疫情，2013年和2015年又分別在法屬波利尼西亞和巴西發生大型疫情。已有的研究表明寨卡病毒病可能會造成神經和自身免疫系統并發癥，在巴西出現的疫情中，當地衛生當局發現在普通民眾中寨卡病毒感染和吉蘭-巴雷綜合征同時有所上升，目前研究人員正在對吉蘭-巴雷綜合征病例激增與寨卡病毒感染之間潛在的但尚未證實的聯系進行研究。另外越來越多的證據表明寨卡病毒與小頭癥之間存有關聯。2015年5月，巴西報告首例寨卡病毒病病例，同年10月，巴西報告新生兒小頭畸形明顯上升，時空分布與寨卡病毒流行區相吻合。然而，在能夠更好地解釋嬰兒小頭癥與寨卡病毒之間的關系之前仍需要作出更多調查，目前對其他可能病因還在開展進一步調查。

寨卡病毒屬于黃病毒科(Flaviviridae)黃病毒屬(Flavivirus)，為單鏈正義RNA病毒，基因組全場約10.8kb。寨卡病毒離子呈球形，直徑約40-70nm。分子生物學和生物信息學分析表明，寨卡病毒主要存在非洲型和亞洲型兩個亞型，在系統發生樹上與同為黃病毒屬的登革病毒、日本腦炎病毒及西尼羅病毒相近。寨卡病毒基因組只有一個開放閱讀框(open reading frame，DRF)，所編碼的蛋白前體經宿主蛋白酶和病毒蛋白酶切割成不同功能蛋白，包括3個結果蛋白(C、prM/M、E)和7個非結構蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。

目前針對寨卡病毒的實驗室診斷方法有病原學方法、血清學方法和針對病毒核酸檢測技術。傳統的病原學方法主要通過細胞進行病毒分離，耗時、耗力，而且寨卡病毒的病毒血癥持續時間短，較難采集到合適的樣品。血清學試驗，包括ELISA、免疫熒光、中和試驗等，也被廣泛應用于寨卡病毒的實驗室檢測。但是病毒特異性IgM和中和抗體出現較晚，約發病后1周末期才可檢出，同時黃病毒間交叉反應常見，難以鑒別。熒光定量雖然重復性好、定量準確，但其所需設備精密，實驗操作要求高，限制其大范圍的使用。

自2016年2月9日我國確認第一例輸入性寨卡病例以來，截止到2016年5月18日已經確診17例寨卡病毒感染病例，均為輸入性病例，入境口岸大多在廣東地區。根據廣東地區的伊蚊分布、人口密度和出入境流動情況，以及疫區疾病流行趨勢分析，推測廣東地區地區輸入性病例還會有所增加；針對伊蚊分布廣泛的地區進行風險評估和預警分析，結果顯示寨卡病毒在廣東地區發生地方性流行的風險指數較高。因此，建立一種快速、準確、靈敏、操作簡單的檢測方法對我國的寨卡病毒防控工作具有重要的意義。

發明內容

為了解決現有技術存在的問題，本發明提供了一種能夠快速、準確、靈敏、操作簡單地檢測出是否感染寨卡病毒的環介導等溫擴增熒光引物組、試劑盒及檢測方法。

本發明的目的是提供一種用于檢測寨卡病毒的引物組。

本發明的再一目的是提供一種含有所述引物組的試劑盒以及能夠快速、準確、靈敏、操作簡單的檢測出是否感染寨卡病毒的檢測方法。

根據本發明的用于檢測寨卡病毒的引物組，包括引物P1、引物P2、引物P3、引物P4、引物P5和引物P6，所述引物P1的序列如SEQ ID NO：1所示，所述引物P2的序列如SEQ ID NO：2所示，所述引物P3的序列如SEQ ID NO：3所示，所述引物P4的序列如SEQ ID NO：4所示，所述引物P5的序列如SEQ ID NO：5所示，所述引物P6的序列如SEQ ID NO：6所示。

其中，SEQ ID NO：1的序列為：CAGTGTGAAGAAGAACTATCAA；

SEQ ID NO：2的序列為：TGTGATGTTACCTGATAG；

SEQ ID NO：3的序列為：

TGCGCATATCAGGCCAACAACTGCTGTTGCAGACGCG；

SEQ ID NO：4的序列為：