[發(fā)明專利]改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架及制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711060223.7
• 申請(qǐng)日: 2017-11-01
• 公開（公告）號(hào): CN107854732A
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曲志偉;肖霄;李保強(qiáng);閆景龍;畢佳琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈爾濱市第一醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61L27/56
• 分類號(hào): A61L27/56;A61L27/20;A61L27/12;A61L27/22;A61L27/50
• 代理公司: 北京國(guó)坤專利代理事務(wù)所(普通合伙)11491
• 代理人: 黃耀鈞

1.一種改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架，其特征在于，所述改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架通道孔及球形孔分別為150μm至650μm和3μm至15μm；殼聚糖：羥基磷灰石質(zhì)量比為7：3。

2.一種如權(quán)利要求1所述改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

通過原位雜交技術(shù)及凍干方法獲得孔及球形孔的CS/HA支架；

通過氫鍵連接CS和RGD肽，通過靜電自主裝法將RGD多肽修飾在CS/HA支架孔道表面，制備含有RGD肽的CS/HA高效粘附細(xì)胞的三維多空支架。

3.如權(quán)利要求2所述改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架的制備方法，其特征在于，通過改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架與MSCs體外復(fù)合細(xì)胞培養(yǎng)，評(píng)價(jià)改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架對(duì)于MSCs細(xì)胞的短期粘附率，細(xì)胞與改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架支架的粘附微觀形態(tài)的影響。

4.如權(quán)利要求2所述改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架的制備方法，其特征在于，將RGD多肽修飾在CS/HA支架孔道表面后，通過PicoGreen細(xì)胞繁殖定量檢測(cè)RGD/CS/HA材料上的細(xì)胞生長(zhǎng)。

5.如權(quán)利要求2所述改進(jìn)空隙及孔隙促進(jìn)細(xì)胞黏附率的復(fù)合支架的制備方法，其特征在于，原位雜交法CS/HA支架的制備包括：

將一定重量的Ca(NO₃)₂·4H₂O和KH₂PO₄添加到體積比為2％的乙酸溶液中混合；然后應(yīng)用磁力攪拌器攪拌3h直至沉積的鈣鹽完全溶解，配制成HA前驅(qū)體溶液；調(diào)整液體pH值至4.0；

然后將CS粉末添加到溶液中，在室溫下應(yīng)用磁力攪拌器攪拌4小時(shí)，得到質(zhì)量比為4％CS溶液，然后4％CS溶液將轉(zhuǎn)移到干凈的燒杯中，靜置24h脫泡，形成CS與HA均勻一致的凝膠棒的前驅(qū)體溶液；

然后取2ml CS溶液注入模具中先形成一層凝固的CS膜，再將已靜置好的殼聚糖與羥基磷灰石前驅(qū)體溶液10毫升注入模具內(nèi)表面鑄造造模，室溫下靜置12h后將造模浸入5wt％氫氧化鈉溶液浸泡，形成水凝膠；將水凝膠棒用去離子水沖洗至pH值在7，然后置于60℃烘箱中空氣干燥8-10h；凝膠棒逐漸變?yōu)橹睆?0mm時(shí)停止烘干，將凝膠棒放入冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥，得到棒狀支架材料；高溫高壓消毒后備用。