[發(fā)明專利]一種抗菌肽、編碼序列及制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711059605.8 | 申請日： | 2017-11-01 |
| 公開（公告）號： | CN107586328A | 公開（公告）日： | 2018-01-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 不公告發(fā)明人 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣州郡雅科技應(yīng)用有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/46 | 分類號： | C07K14/46;C12N15/12;C12N15/866 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 510730 廣東省廣州市廣州經(jīng)濟(jì)技術(shù)開*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 抗菌 編碼 序列 制備 方法 | ||
1.一種真核細(xì)胞表達(dá)抗菌cathelicidin-AM1的方法，其特征在于，所述抗菌肽cathelicidin-AM1的氨基酸序列為SEQ ID NO：1所示，且編碼所述抗菌肽cathelicidin-AM1的核苷酸序列為SEQ ID NO：2所示。
2.一種真核細(xì)胞表達(dá)抗菌肽cathelicidin-AM1的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）構(gòu)建包含SEQ ID NO：2所示核苷酸序列的重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體；
2）將構(gòu)建好的重組轉(zhuǎn)移載體與苜蓿銀蚊夜蛾多核型多角體病毒AcNPV-DNA共轉(zhuǎn)染Sf21細(xì)胞，按以下方式獲得表達(dá)抗菌肽cathelicidin-AM1的重組病毒：
在1.5ml滅菌的Eppendorf管中加入5μg重組轉(zhuǎn)移載體DNA、15μg AcNPV-DNA及1.0ml共轉(zhuǎn)染緩沖液，將該混合物在室溫下孵育30min后共轉(zhuǎn)染對數(shù)期的Sf21細(xì)胞；然后將共轉(zhuǎn)染后的Sf21細(xì)胞先用無血清培養(yǎng)基Sf-900ⅡSFM培養(yǎng)基清洗兩次，再用含有10%FBS的完全培養(yǎng)基在27℃下培養(yǎng)4~6d，收集培養(yǎng)上清作為病毒原液用來篩選重組病毒，重組病毒經(jīng)過空斑篩選，獲得病毒溶液，該病毒命名為含有抗菌肽Cathelicidin-JY1基因的重組病毒；
3）重組病毒感染生長旺盛的Sf21細(xì)胞，27℃培養(yǎng)4~6d進(jìn)行感染表達(dá)，之后通過離心收集培養(yǎng)液。
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