[發(fā)明專利]分泌型抗免疫檢查點(diǎn)抗體、胞內(nèi)免疫檢查點(diǎn)抑制分子及tEGFR分子的共表達(dá)及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711058873.8
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN109750066A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃雪芬;陳思毅
• 申請（專利權(quán)）人: 艾生命序公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;C07K19/00;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

本發(fā)明提出了一種表達(dá)載體、慢病毒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞、分泌型抗體以及用于治療癌癥的治療組合物。該表達(dá)載體攜帶下列核酸分子：(a)第一核酸分子，所述第一核酸分子編碼分泌型免疫檢查點(diǎn)抑制分子片段；(b)第二核酸分子，所述第二核酸分子用于沉默細(xì)胞內(nèi)免疫檢查點(diǎn)，任選地，進(jìn)一步攜帶第三核酸分子，所述第三核酸分子編碼無功能EGFR。將本發(fā)明實(shí)施例的表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞中，分泌型抗免疫檢查點(diǎn)抗體在受體細(xì)胞中高效表達(dá)并分泌到細(xì)胞外，同時(shí)受體細(xì)胞的免疫檢查點(diǎn)分子被特異性沉默，由免疫檢查點(diǎn)介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制被阻遏。將本發(fā)明實(shí)施例的表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞中，淋巴細(xì)胞的增殖能力及效應(yīng)功能增強(qiáng)，對腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷更強(qiáng)大更有效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及共表達(dá)分泌型抗免疫檢查點(diǎn)抗體、胞 內(nèi)免疫檢查點(diǎn)抑制分子及tEGFR表面標(biāo)記的細(xì)胞及其應(yīng)用，更具體地，本發(fā)明涉及表達(dá)載 體、慢病毒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞、分泌型抗體以及用于治療癌癥的治療組合物。

背景技術(shù)

癌癥，由于細(xì)胞內(nèi)基因突變導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控的一種疾病。目前已成為人類健康的重 大威脅，是導(dǎo)致人類死亡的主要原因之一。世界衛(wèi)生組織(WHO)在發(fā)表的《全球癌癥報(bào)告2014》中指出，2012年全球癌癥患者和死亡病例都在迅速增加。因此，尋找高效特異的 癌癥治療方法具有重大的臨床價(jià)值。

傳統(tǒng)的腫瘤治療方法主要包括手術(shù)、放療和化療，但這幾種方法都具有較大的局限性， 比如由于癌細(xì)胞的近端入侵或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除后的腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率較高，而放療和化 療對于機(jī)體自身的正常細(xì)胞尤其是造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)會造成嚴(yán)重的損害，因此對于已發(fā) 生腫瘤轉(zhuǎn)移的患者也很難達(dá)到較好的遠(yuǎn)期療效。隨著腫瘤分子機(jī)制的深入研究和生物技術(shù) 的進(jìn)一步發(fā)展，靶向藥物治療和免疫治療在腫瘤的綜合治療中發(fā)揮著愈來愈大的作用。靶 向療法主要包括單克隆抗體和小分子靶向藥物，而免疫療法主要包括細(xì)胞因子療法、免疫 檢查點(diǎn)單抗、過繼免疫療法，腫瘤疫苗等，通過調(diào)動(dòng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而控制和 殺傷腫瘤細(xì)胞，因此有效率高，特異性強(qiáng)，耐受性好的優(yōu)點(diǎn)，在腫瘤治療中具有廣闊的前 景。

然而，腫瘤的免疫療法只對部分病人有效，仍有待進(jìn)一步深入研究和開發(fā)，來增強(qiáng)臨 床療效。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。

在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種表達(dá)載體。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述表達(dá) 載體攜帶下列核酸分子：(a)第一核酸分子，所述第一核酸分子編碼分泌型免疫檢查點(diǎn)抑 制分子片段；(b)第二核酸分子，所述第二核酸分子用于沉默細(xì)胞內(nèi)免疫檢查點(diǎn)，任選地， 進(jìn)一步攜帶第三核酸分子，所述第三核酸分子編碼無功能EGFR表面標(biāo)記。將本發(fā)明實(shí)施 例的表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞中，分泌型抗免疫檢查點(diǎn)抗體在受體細(xì)胞中高效表達(dá)并分泌到 細(xì)胞外，同時(shí)受體細(xì)胞的免疫檢查點(diǎn)分子被特異性沉默，由免疫檢查點(diǎn)介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī) 制被阻遏。將本發(fā)明實(shí)施例的表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞中，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞的增 殖能力增強(qiáng)，對腫瘤細(xì)胞的特異性殺傷更強(qiáng)大更有效。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，上述表達(dá)載體還可以進(jìn)一步包括如下一種或多種附加技術(shù)特征：

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述分泌型免疫檢查點(diǎn)抑制分子片段包括：抗免疫檢查點(diǎn)單鏈 抗體分子以及IgG Fc，任選地，所述IgG Fc為IgG1Fc或IgG4Fc。由此，分泌型免疫檢查點(diǎn)抑制分子片段分泌到細(xì)胞外，并且與細(xì)胞表面的免疫檢查點(diǎn)特異性結(jié)合，進(jìn)而有效阻遏免疫檢查點(diǎn)介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述免疫檢查點(diǎn)分子包括選自CTLA4、PD-1、PD-L1，PD-L2，TIM3、BTLA、LAG-3、IRAK-M、SOCS1、A20、CBL-B的至少之一。將本發(fā)明實(shí)施例 的表達(dá)載體導(dǎo)入受體淋巴細(xì)胞，一方面，分泌型免疫檢查點(diǎn)抑制分子片段分泌出后與上述 免疫檢查點(diǎn)分子結(jié)合，進(jìn)而競爭性抑制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，另一方面，受體淋巴細(xì)胞的 免疫檢查點(diǎn)被沉默，淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫逃逸機(jī)制又被抑制，進(jìn)而淋巴細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的 特異性殺傷進(jìn)一步顯著增強(qiáng)。