[發明專利]分泌型抗免疫檢查點抗體、胞內免疫檢查點抑制分子及tEGFR分子的共表達及其應用

在審

• 申請號: 201711058873.8
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN109750066A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 黃雪芬;陳思毅
• 申請（專利權）人: 艾生命序公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;C07K19/00;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙天月

1.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體攜帶下列核酸分子：

(a)第一核酸分子，所述第一核酸分子編碼分泌型免疫檢查點抑制分子片段；

(b)第二核酸分子，所述第二核酸分子用于沉默細胞內免疫檢查點，

任選地，進一步攜帶第三核酸分子，所述第三核酸分子編碼無功能EGFR。

2.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述分泌型免疫檢查點抑制分子片段包括：抗免疫檢查點單鏈抗體分子以及IgG Fc，

任選地，所述IgG Fc為IgG1Fc或IgG4Fc。

3.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述免疫檢查點包括選自PD-L1，PD-L2，CTLA4、PD-1、TIM3、BTLA、LAG-3、IRAK-M、SOCS1、A20、CBL-B的至少之一。

4.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述分泌型免疫檢查點抑制分子片段為抗PD-L1單鏈抗體和IgG1Fc融合蛋白分子，

任選地，所述分泌型免疫檢查點抑制分子片段為抗PD-1單鏈抗體和IgG4Fc融合蛋白分子，

任選地，所述分泌型免疫檢查點抑制分子片段為抗TIM3單鏈抗體和IgG4Fc融合蛋白分子，

任選地，所述分泌型免疫檢查點抑制分子片段為抗LAG3單鏈抗體和IgG4Fc融合蛋白分子，

任選地，所述分泌型免疫檢查點抑制分子片段為抗CTLA4單鏈抗體和IgG4Fc融合蛋白分子。

5.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述沉默是通過shRNA、反義核酸、核酶、顯性負突變、CRISPR-Cas9、CRISPR-Cpf1和鋅指核酸酶至少之一實現的，

優選地，所述沉默是通過shRNA實現的。

6.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述第一核酸分子具有SEQ ID NO：1～5所示的核苷酸序列。

7.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述第二核酸分子具有SEQ ID NO：6～138所示的核苷酸序列，

任選地，所述第三核酸分子具有SEQ ID NO：139所示的核苷酸序列。

8.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，進一步包括：

第一啟動子，所述第一啟動子與所述第一核酸分子可操作地連接；

第二啟動子，所述第二啟動子與所述第二核酸分子可操作地連接；以及

任選的第三啟動子，所述任選的第三啟動子與所述第三核酸分子可操作地連接。

9.根據權利要求8所述的表達載體，其特征在于，所述第一啟動子、所述第二啟動子、所述第三啟動子分別獨立地選自U6，H1，CMV，EF-1，LTR或RSV啟動子。

10.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體包括第一核酸分子、第二核酸分子和第三核酸分子，所述表達載體進一步包括：

內部核糖體進入位點序列，所述內部核糖體進入位點序列設置在所述第一核酸分子與所述第三核酸分子之間，所述內部核糖體進入位點具有SEQ ID NO：140所示的核苷酸序列。

11.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體包括第一核酸分子、第二核酸分子和第三核酸分子，并且所述表達載體進一步包括:

第四核酸分子，所述第四核酸分子設置在所述第一核酸分子與所述第三核酸分子之間或多個所述第一核酸分子之間，并且所述第四核酸分子編碼連接肽。

12.根據權利要求11所述的表達載體，其特征在于，所述連接肽具有SEQ ID NO：141～144所示的氨基酸序列。

13.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體是非致病性病毒載體。