[發(fā)明專利]一種高載量的蛋白A免疫吸附材料及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711057857.7
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107754764B
• 公開（公告）日: 2020-05-05
• 發(fā)明（設計）人: 張旭鋒;王宇;楊家梅;鄧瑤;楊海艷;郭仁玲
• 申請（專利權）人: 云南師范大學
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C07K1/22
• 代理公司: 廣州潤禾知識產權代理事務所(普通合伙) 44446
• 代理人: 鄭永泉

本發(fā)明涉及血液凈化材料技術領域，具體公開了一種高載量的蛋白A免疫吸附材料及其制備方法。蛋白A免疫吸附材料為親水性凝膠微球與蛋白A偶聯(lián)的高分子材料，該材料以親水性凝膠微球為載體基質，通過環(huán)氧氯丙烷活化，或者高碘酸鈉氧化后，與乙二胺反應得到氨基載體；得到的氨基載體與雙縮水甘油醚反應后得到活性載體，最后與蛋白A進行偶聯(lián)反應得到。該材料偶聯(lián)的蛋白A含量高，對免疫球蛋白及其復合物的吸附效率高，可應用于臨床上免疫吸附治療。

技術領域

本發(fā)明涉及血液凈化材料，尤其涉及一種高載量的蛋白A免疫吸附材料及其制備方法。

背景技術

各種自身免疫性疾病和器官移植排斥反應都是由于人體內產生自身抗體，對抗自身組織器官或移植器官，引起組織器官的損害而導致的一系列疾病，是目前國內外醫(yī)學界面臨的治療難題之一。自身免疫性疾病是由于人體免疫系統(tǒng)發(fā)生紊亂而導致，具有相當高的致殘率或病死率，常見的有系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、血友病、類風濕關節(jié)炎(RA)、系統(tǒng)性硬化(SSc)、重癥肌無力(MG)、干燥綜合征(SS)等。移植排斥反應是器官移植失敗的主要原因，這涉及到病人機體對移植的異源器官所產生的免疫不耐受，進而促使供體特異性抗體的產生。針對這類急危重癥，傳統(tǒng)的藥物和手術治療無能為力，而免疫吸附療法通過選擇性清除患者血液中致病性抗體，具有其獨特的療效，已成為近年來國內外的推薦療法。

免疫吸附療法利用親和層析的原理，直接從患者血液中選擇性或特異性地清除致病因子，從而達到凈化血液，治療疾病的目的。蛋白A是一種從金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)提取出來的單鏈蛋白質，它對IgG抗體的Cγ2-Cγ3區(qū)域具有高度的選擇性和親和性。蛋白A的N端含有5個組成高度類似的IgG結合區(qū)：E、D、A、B、C，這五個結合區(qū)分別都能與IgG抗體的Fc段結合，且吸附能力相近。將蛋白A偶聯(lián)到凝膠載體上，當患者的血液經過該吸附材料時，一些因抗體質與量的改變而導致的疾病就可得到緩解或治愈。臨床應用結果表明，蛋白A免疫吸附治療對自身免疫性疾病、器官移植排斥反應等具有很好的治療效果。

2000年，美國食品藥品管理局(FDA)批準德國Fresenius公司蛋白A免疫吸附柱Immunosorba用于治療帶有抑制因子的血友病和其它自身免疫性疾病。該吸附材料每毫升可吸附20mg抗體，每支吸附柱一次可吸附1.2g抗體(每支吸附柱填充62.5ml吸附劑)。一般而言，患者體內抗體總量為30～40g，為達到充分清除抗體的目的，治療時兩支吸附柱安裝在配套設備：連續(xù)免疫吸附治療監(jiān)視與控制系統(tǒng)(CITEM 10)上使用，由預制電腦程序控制兩個吸附柱交替“吸附－再生－吸附”，循環(huán)進行，每支吸附柱與患者血漿反復接觸、吸附10次，每次治療后(兩支吸附柱各經過10次循環(huán)吸附)可清除抗體20克左右，實現對致病物質清除的連續(xù)性和相對非受限性。

目前，關于蛋白A免疫吸附材料合成方法的專利很多(CN1367181A，CN1365853A，CN101190409A，CN101185878A)，這些方法合成得到的吸附材料對抗體的吸附能力都在20mg/mL左右。由于吸附柱對抗體的吸附能力不高，吸附柱必須配套CITEM 10系統(tǒng)，這阻礙了蛋白A免疫吸附療法在臨床上的廣泛應用。蛋白A免疫吸附材料的合成方法主要通過蛋白質上的氨基與載體上的活性基團反應，活性基團一般為醛基(CN101185878A，CN102000550A)、羰基咪唑(CN101190409A、CN1367181A)、環(huán)氧基(CN1365853A、CN101069751A)等，特別是環(huán)氧基與蛋白A反應后鍵接牢固，蛋白A不易脫落，適用于臨床用蛋白A免疫吸附材料的制備。但由于環(huán)氧基與蛋白質反應的活性不高，偶聯(lián)率較低，制備得到的蛋白A免疫吸附材料對抗體的吸附性能也較低。因此，本發(fā)明試圖尋找一種新的反應活性很高的環(huán)氧基活化載體，實驗發(fā)現通過在載體和環(huán)氧基之間鍵接12個碳以上的分子間隔臂后，能夠制備高載量的蛋白A免疫吸附材料，同時該吸附材料對抗體的吸附量最高可達到60mg/g，這種高吸附性能對蛋白A免疫吸附療法的廣泛應用至為關鍵。

發(fā)明內容