[發明專利]一種高載量的蛋白A免疫吸附材料及其制備方法有效
| 申請號： | 201711057857.7 | 申請日： | 2017-11-01 |
| 公開（公告）號： | CN107754764B | 公開（公告）日： | 2020-05-05 |
| 發明（設計）人： | 張旭鋒;王宇;楊家梅;鄧瑤;楊海艷;郭仁玲 | 申請（專利權）人： | 云南師范大學 |
| 主分類號： | B01J20/22 | 分類號： | B01J20/22;B01J20/28;B01J20/30;C07K1/22 |
| 代理公司： | 廣州潤禾知識產權代理事務所(普通合伙) 44446 | 代理人： | 鄭永泉 |
| 地址： | 650500 云南省*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高載量 蛋白 免疫 吸附 材料 及其 制備 方法 | ||
1.一種蛋白A免疫吸附材料的制備方法，其特征在于，
所述蛋白A免疫吸附材料具有如下化學結構：
其中，為親水性凝膠微球；X為CH2或者基團；n為1或2或3；SPA為蛋白A；
所述制備方法包括如下步驟：
S1：在親水性凝膠微球上形成伯氨基；
S2：將步驟S1所得的產物置于碳酸鹽緩沖溶液中，加入雙縮水甘油醚，反應結束后獲得活性載體；
S3：將步驟S2所得的活性載體置于硼酸緩沖溶液中，加入蛋白A反應；
S4：用封端試劑與步驟S3所得產物的殘余的環氧基反應封端，得到蛋白A免疫吸附材料；
步驟S1中：將親水性凝膠微球置于二甲亞砜中混合后，加入氫氧化鈉、硼氫化鈉和環氧氯丙烷，在20～40℃反應2～6小時后，用水沖洗、抽干，加入0.2～1M的乙二胺溶液，調節pH為9～11，在20～40℃反應6～10小時后，用水沖洗、抽干，得到含有伯氨基的凝膠微球；或者，將親水性凝膠微球與0.05～0.2M的高碘酸鈉溶液混合后，在20～40℃反應1～4小時后，用水沖洗、抽干，加入0.2～1M的乙二胺溶液，調節pH為8～10，在20～40℃反應2～4小時后，加入硼氫化鈉繼續反應4～8小時，用水沖洗、抽干，得到含有伯氨基的凝膠微球；
步驟S2中：碳酸鹽緩沖液為碳酸氫鈉緩沖液，將步驟S1中所得產物加入0.1～0.5M的碳酸氫鈉緩沖液中，調節pH至8～10，加入雙縮水甘油醚，在20～40℃反應12～24小時，用水沖洗、抽干；
步驟S3中：將步驟S2中所得產物加入0.1～0.2M的硼酸緩沖溶液中，調節pH至7～8.5，加入蛋白A，在20～40℃反應12～24小時，用水沖洗、抽干；
步驟S4中：將步驟S3中所得產物加入0.1～1M的封端試劑溶液中，調節pH至8～10，在20～40℃反應6～12小時與殘余的環氧基反應封端，用水沖洗、抽干，得到蛋白A免疫吸附材料。
2.根據權利要求1所述的蛋白A免疫吸附材料的制備方法，其特征在于，所述雙縮水甘油醚為乙二醇雙縮水甘油醚、1,4-丁二醇雙縮水甘油醚、1,6-己二醇雙縮水甘油醚。
3.根據權利要求1所述的蛋白A免疫吸附材料的制備方法，其特征在于，步驟S4中的封端試劑為乙醇胺、巰基乙醇或甘氨酸。
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