[發明專利]預測腫瘤壞死因子抑制劑療效的試劑和方法

有效

• 申請號: 201711057457.6
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107817353B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 王久存;劉晶;鄒和建;任士芳;顧建新;牛振民;金力;李媛;馬彥云;杜愛平
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N27/62;G01N30/02;G01N24/08
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發明涉及預測腫瘤壞死因子抑制劑療效的試劑和方法。具體而言，本發明提供試劑和/或儀器在制備用于預測使用腫瘤壞死因子抑制劑治療強直性脊柱炎患者療效的產品中的應用，其中，所述試劑和/或儀器包括用于測定血液IgG表面雙天線復雜型N糖鏈的末端半乳糖基化水平的試劑和/或儀器，其中，所述末端半乳糖基化水平為IgG表面末端無半乳糖連接的雙天線復雜型N?糖鏈水平Gal0、末端連有1個半乳糖的雙天線復雜型N?糖鏈水平Gal1和末端連有2個半乳糖的雙天線復雜型N?糖鏈水平Gal2。

技術領域

本領域涉及預測腫瘤壞死因子抑制劑療效的試劑和方法。

背景技術

強直性脊柱炎是一種免疫介導的炎癥性疾病，以遺傳為主，多種感染致病。腫瘤壞死因子(TNF)是在強直性脊柱炎中廣泛研究的因子。多個功能性的腫瘤壞死因子(TNF)家族的易感位點都與強直性脊柱炎發病相關，并且其參與多個致病通路。因此，目前腫瘤壞死因子抑制劑被廣泛使用用以治療該疾病。但是經研究發現仍有40％的患者對于該藥物沒有應答。因此在臨床上亟需找到生物標志物來預測腫瘤壞死因子的療效。

蛋白的糖基化修飾可以反映真實的胞內環境。免疫球蛋白(IgG)在免疫反應中起到重要作用。另外，通過IgG的糖基修飾可以調控免疫細胞的活性。根據文獻報導，IgG無半乳糖修飾比例在多種自身免疫性疾病患者中升高。同時，IgG半乳糖化調控了炎癥型的免疫紊亂以及破骨細胞的分化與形成。

發明內容

本發明通過結合藥物基因組和翻譯后修飾(IgG半乳糖修飾)來有效預測腫瘤壞死因子抑制劑的療效。

具體而言，本發明提供試劑和/或儀器在制備用于預測使用腫瘤壞死因子抑制劑治療強直性脊柱炎患者療效的產品中的應用，其中，所述試劑和/或儀器包括用于測定血液IgG表面雙天線復雜型N糖鏈的末端半乳糖基化水平的試劑和/或儀器，其中，所述末端半乳糖基化水平為IgG表面末端無半乳糖連接的雙天線復雜型N-糖鏈水平Gal0、末端連有1個半乳糖的雙天線復雜型N-糖鏈水平Gal1和末端連有2個半乳糖的雙天線復雜型N-糖鏈水平Gal2。

在某些實施方案中，所述腫瘤壞死因子抑制劑為融合蛋白類藥物。

在某些實施方案中，所述用于測定血液IgG表面雙天線復雜型N糖鏈的末端半乳糖基化水平的試劑和/或儀器包括在以下一種或多種方法中用到的試劑和/或儀器：質譜法，例如基質輔助激光解析飛行時間質譜法、快原子轟擊質譜和電噴霧質譜；液相色譜法；液相色譜-質譜聯用法；糖芯片技術；和核磁共振NMR。

在某些實施方案中，所述方法為基質輔助激光解析飛行時間質譜法，所述試劑為質量校正標準品TOFmix、2,5-二羥基苯甲酸和乙醇。

在某些實施方案中，所述產品還包括選自下組的一種或多種試劑和/或儀器：

a)用于采集和/或處理對象血液樣品的試劑和/或儀器；

b)用于分離和/或純化血清/血漿IgG的試劑和/或儀器；和

c)用于分離、純化和/或富集血清IgG表面N-糖鏈的試劑和/或儀器。

在某些實施方案中，所述用于分離和/或純化血清/血漿IgG的試劑和/或儀器為在使用下述任一種方法分離IgG時使用到的試劑和儀器：IgG純化柱、鹽析法、有機溶劑沉淀法、聚乙二醇置換法、液相層析和親合層析。

在某些實施方案中，所述試劑和/或儀器為使用IgG純化柱分離樣品中的IgG時使用到的試劑和儀器，其中，儀器為蛋白A純化柱，試劑包括與純化柱配套的弱堿性結合緩沖溶液和弱酸性淋洗緩沖溶液。

在某些實施方案中，所述用于分離、純化和/或富集血清IgG表面N-糖鏈的試劑和/或儀器為采用酶法和化學法從IgG上分離N糖鏈時使用到的試劑和儀器。

在某些實施方案中，酶法中使用到的試劑包括糖苷酶，優選糖苷酶PNGase F。