[發明專利]測定丹參多糖水解產物-半乳糖醛酸的方法

有效

• 申請號: 201711056624.5
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107966502B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 張濤;羅軼;何頌華;白桂昌;呂軼峰;羅永強;朱雪妍
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來光業

本發明公開了一種采用HPLC法測定丹參多糖水解產物?半乳糖醛酸的方法，對現有復方丹參片的檢驗方法進行了補充，檢驗方法包括如下內容：（1）收集復方丹參片樣品，（2）明確色譜條件，（3）測定校正因子，（4）制備供試品溶液，（5）考察被測溶液的穩定性、半乳糖醛酸進樣量與峰面積比值的線性關系，并進行準確度、精密度和重現性試驗，（6）測定樣品中半乳糖醛酸的含量。本發明準確度高、精密度好、重現性好，為復方丹參片中丹參不按標準工藝提取、僅用適宜濃度乙醇提取的檢出提供檢驗依據。

技術領域

本發明涉及中醫藥檢測技術領域，具體是測定丹參多糖水解產物-半乳糖醛酸的方法，屬于一種復方丹參片的補充檢驗方法。

背景技術

復方丹參片的處方由丹參、三七和冰片等三味藥材組成，其中丹參依次經95%乙醇、50%乙醇提取及水煎煮后濃縮以浸膏投料，三七細粉和冰片直接入藥。據了解，當前市場上用于復方丹參片投料的丹參提取物，多為丹參采用適宜濃度的乙醇提取，而以丹參酮Ⅱ_A含量0.3%、丹酚酸B含量7.0%的丹參提取物投料，即可滿足復方丹參片現行藥典標準中丹參【鑒別】和【含量測定】的要求。但與復方丹參片中丹參的標準工藝相比，這些丹參提取物缺少水煎煮步驟，多糖含量低。因此，需要對現行藥典標準中丹參【鑒別】和【含量測定】要求進行進一步的補充檢驗。

發明內容

基于此，本發明提供了一種測定丹參多糖水解產物-半乳糖醛酸的方法，采用HPLC法測定丹參多糖水解產物-半乳糖醛酸含量。本發明準確度高、精密度好、重現性好，為復方丹參片中丹參不按標準工藝提取、僅用適宜濃度乙醇提取的檢出提供檢驗依據。

為實現上述技術目的，具體內容如下：

1、儀器與試藥：

AgiLent 1100液相色譜儀，可變波長檢測器；DAD檢測器；Waters UPLC液相色譜儀，可變波長檢測器；

半乳糖醛酸對照品：中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號：111646-200301，含量測定用；

鹽酸氨基葡萄糖對照品：中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號：140649-201505，含量測定用；

乙腈為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2、測定方法如下：

（1）收集復方丹參片樣品；

（2）色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（用40%氫氧化鈉溶液調節pH值至6.9）（18﹕82）為流動相；檢測波長為250nm。理論板數按半乳糖醛酸峰計算應不低于3000；

（3）校正因子測定：取鹽酸氨基葡萄糖適量，精密稱定，加水制成每1mL含1mg的溶液，作為內標溶液；另取半乳糖醛酸對照品約10mg，置20mL量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，精密吸取2mL,置10mL量瓶中，精密加入內標溶液1mL，加水稀釋至刻度，搖勻，吸取400μL，加0.5mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液與0.3mol/L的氫氧化鈉溶液各400μL，混勻，70℃水浴反應100分鐘。再加0.3mol/L鹽酸溶液500μL，混勻，用三氯甲烷洗滌3次，每次2mL，棄去三氯甲烷液，水層加酚酞指示液1滴，用0.3mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至中性，離心，精密吸取0.7mL，精密加入磷酸鹽緩沖溶液（pH12，取0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液50mL，加0.1mol/L 氫氧化鈉溶液26.9mL，用水稀釋至100mL即得）0.7mL，混勻，吸取20μL，注入液相色譜儀，測定，計算校正因子；