[發明專利]一種發狀念珠藻的培養方法

有效

• 申請號: 201711056370.7
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107629984B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 曲樹杰;黃超;朱愛國;李文剛;尤升波;于金慧;馬德源;畢玉平
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院試驗基地服務中心;山東省農業科學院生物技術研究中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 孔娟

本發明屬于藻類培養技術領域，尤其涉及一種發狀念珠藻的培養方法。該方法包括使用平板分離法對野外采集的發狀念珠藻分離純化，得到藻種接種于培養基中得到接種藻體，將接種藻體接種到固體培養基中，保持手術固體培養基濕潤，培養得到移植藻體，所述固體培養基中包括以下質量份數的原料：腐殖酸土100?150份、硅酸鹽分子篩1?5份、藻酸鹽0.2?0.7份、K₂HPO₄ 1?5份、檸檬酸鐵銨0.5?1份、脂肪醇0.5?1份和水500?800份；將移植藻體連同固體培養基轉移到土壤中，培養即可得發狀念珠藻。本發明提供的方法適用于在土壤貧瘠的地區大量栽培發狀念珠藻，起到固氮作用，改善土壤結構。

技術領域

本發明屬于藻類培養技術領域，尤其涉及一種發狀念珠藻的培養方法。

背景技術

發狀念珠藻是一種主要分布于我國西部的陸生固氮藍藻，俗稱發菜，是國家I級重點保護野生植物。由于發狀念珠藻能用無機碳和無機氮合成有機碳和有機氮，對改良荒漠土壤，繁衍其他生物有重要意義。發菜被譽為“開發荒漠的先鋒”。由于發菜產地通常相當貧窮，有農民以采挖發菜賣錢謀生。但由于多年來過量采挖發菜，其野生資源已被嚴重破壞，并導致大片草場退化和土地荒漠化。發菜的分布范圍也隨著土地的開發而大量減少。

為了能使發狀念珠藻資源得以恢復，保護資源和環境，有關發狀念珠藻的大規模栽培一直受到關注。由于我們西部土壤貧瘠，沙性大，結構松散，發狀念珠藻在這種環境下生長緩慢。因此，先將發狀念珠藻細胞在培養基中培養，得到發狀念珠藻菌體；再將發狀念珠藻菌體接種于土壤中。但是培養基中發狀念珠藻的增殖速度較慢，而且已發生染菌現象，影響發狀念珠藻的大規模栽培。

發明內容

針對發狀念珠藻增殖速度緩慢，難以大規模栽培的問題，本發明提供一種發狀念珠藻的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）使用平板分離法對野外采集的發狀念珠藻經分離純化，得到藻種；

（2）將所述藻種接種于液體培養基中，在光照培養箱中培養得到接種藻體，其中，所述液體培養基包括BG11培養基；

（3）將所述接種藻體接種到固體培養基中，在室外定期補充水分保持固體培養基濕潤，培養得到移植藻體，所述固體培養基中包括以下質量份數的原料：腐殖酸土100-150份、硅酸鹽分子篩1-5份、藻酸鹽0.2-0.7份、K₂HPO₄ 1-5份、檸檬酸鐵銨0.5-1份、脂肪醇0.5-1份和水500-800份；

（4）將所述移植藻體連同所述固體培養基轉移到土壤中，定期澆水，培養即可得到成片的發狀念珠藻。

本發明的另一目的是，提高液體培養基與固體培養基的相互作用，進而促進藻體的生長，步驟（2）中，所述液體培養基包括以下質量份數的原料：BG11培養基 70-90份、5-氨基乙酰丙酸0.05-0.1份和肌醇0.1-0.5份。

本發明的再一目的是，增強藻體細胞的生長活力，提高藻體在固體培養基中的生長速率，步驟（3）中，所述固體培養基還包括以下質量份數的原料：谷氨酰胺0.1-0.5份。

具體地，步驟（1）包括：（1）將野外采集的發狀念珠藻稀釋，得到稀釋藻液；（2）將所述稀釋藻液噴射在平板培養基上進行擴大培養，在室溫、光照強度50-80μmol/（m²·s¹）及光暗周期10/14下，擴大培養8-12天所得到的發狀念珠藻細胞培養物作為藻種。

具體地，步驟（2）中，所述藻種的培養條件是：室溫、光照強度30-50μmol/（m²·s¹）和光暗周期12/12；所述藻種在培養過程中，根據液體培養基的消耗，及時補充，并調整液體培養基的pH維持在6.5-7.5。