[發明專利]一種生物降解用微生物的篩選方法

有效

• 申請號: 201711055849.9
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107619826B
• 公開（公告）日: 2023-10-10
• 發明（設計）人: 張朝正;趙津瑩;徐迎;蘭曉彤;李杰;郭聰聰;石悅婷;李曉瑾;蔣應豪;唐慶;馬穎;朱奕;趙有珍
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N1/02
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

技術領域

本發明涉及生物降解技術領域，尤其是一種生物降解用微生物的篩選方法。

背景技術

隨著工業化的加快，污染物的排放變得越來越多和越來越復雜，許多以前沒有出現的污染物開始逐漸被發現。而這些新型的污染物有一個共同的特點就是難于生物降解。

傳統的活性污泥法對于這些微生物的降解存在困難，如何快速篩選有效的微生物在環保領域變得緊迫起來。國內外對該類微生物的篩選方法的研究主要集中在傳統的馴化篩選上，包括：

天然馴化-比如在某污染地點附近(酸，鹽堿或者重金屬)，在它周圍本來微生物是多種多樣的，但是隨著污染物對微生物的生長抑制和毒害作用，大部分的微生物被抑制生長或者殺死，只有部分能適應或者產生變異的微生物留下來，成為優勢菌群，這就是天然馴化；

人工馴化-就是在培養過程中，逐步加入某種物質，讓細菌循序漸進的適應這個繁殖環境，從而馴化出對此種物質耐受或者能降解的微生物群體和種類。

由于這些污染物的生物利用度低，篩選過程變得特別緩慢。各國研究人員一直在探索加快微生物篩選的方法。目前報道的篩選生物降解用微生物的方法均存在費時、費力、降解效果不佳的缺點，不能滿足當前環境生物降解用微生物的獲得和應用要求。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種生物降解用微生物的篩選方法。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

一種生物降解用微生物的篩選方法，將采集到的活性污泥或土樣接種到唯一碳源培養基中，培養后轉入一個電場輔助篩選裝置中，培養過程中同時施以電壓使目標菌株聚集在電極板上，從電極板上得到目標微生物。

優選的，上述生物降解用微生物的篩選方法，具體步驟如下：

(1)菌株的富集培養：將采集到的活性污泥或土樣接種到唯一碳源培養基中培養；

(2)菌種的初篩：將富集培養物轉接入新鮮的唯一碳源培養基中，將轉接后的新鮮培養液轉入電場輔助篩選裝置中培養，至電極板上出現聚集的菌體；

(3)菌種的復篩：將電極板上聚集的菌體轉移到新鮮的唯一碳源培養基中再次篩選；

(4)重復步驟(2)-(3)直至得到純的菌株，將菌種保藏待用。

優選的，上述生物降解用微生物的篩選方法，對于所述步驟(4)篩選得到的菌株可進行：

菌種的考察：將篩選得到的菌株接種到唯一碳源培養基中(例，30℃下培養)，考察菌株對目標污染物的降解效果；

實際環境應用：將經過考察的菌株接種到含有目標污染物的實際環境中(污水、土壤等)考察所述菌株對目標污染物的降解效果。

優選的，上述生物降解用微生物的篩選方法，具體步驟如下：

(1)菌種富集培養：將采集到的活性污泥或土樣接種到唯一碳源培養基中，30℃下培養24-48h至渾濁；

唯一碳源培養基組成：Na₂HPO₄,2.00g；KH₂PO₄,2.00g；NH₄Cl,0.4g；MgSO₄ 0.20g；目標污染物,3～8.00g；2mL的微量元素液；水定溶到1L，pH 7.0；其中，微量元素液配置：每H₃BO₃ 0.232g，ZnSO₄﹒7H₂O 0.174g，FeSO₄(NH₄)₂SO₄﹒6H₂O 0.116g，CoSO₄﹒7H₂O 0.096g，(NH₄)₆Mo₇O₂₄﹒4H2O 0.022g，CuSO₄﹒5H₂O 8mg，MnSO₄﹒4H₂O 8mg，水定溶到1L(不調pH)；

(2)菌種的初篩：將富集培養物以10％的接種量轉接入新鮮的唯一碳源培養基中，將轉接后的新鮮培養液轉入電場輔助篩選裝置中，在30℃條件下培養至電極板上出現聚集的菌體(所有微生物的培養和操作均在無菌條件下完成)；