[發明專利]一種生物降解用微生物的篩選方法

有效

• 申請號: 201711055849.9
• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號: CN107619826B
• 公開（公告）日: 2023-10-10
• 發明（設計）人: 張朝正;趙津瑩;徐迎;蘭曉彤;李杰;郭聰聰;石悅婷;李曉瑾;蔣應豪;唐慶;馬穎;朱奕;趙有珍
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N1/02
• 代理公司: 天津市三利專利商標代理有限公司 12107
• 代理人: 李蕊

1.一種生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：將采集到的活性污泥或土樣接種到唯一碳源培養基中，培養后轉入一個電場輔助篩選裝置中，培養過程中同時施以電壓使目標菌株聚集在電極板上，從電極板上得到目標微生物。

2.根據權利要求1所述的生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)菌株的富集培養：將采集到的活性污泥或土樣接種到唯一碳源培養基中培養；

(2)菌種的初篩：將富集培養物轉接入新鮮的唯一碳源培養基中，將轉接后的新鮮培養液轉入電場輔助篩選裝置中培養，至電極板上出現聚集的菌體；

(3)菌種的復篩：將電極板上聚集的菌體轉移到新鮮的唯一碳源培養基中再次篩選；

(4)重復步驟(2)-(3)直至得到純的菌株，將菌種保藏待用。

3.根據權利要求2所述的生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：對于所述步驟(4)篩選得到的菌株可進行：

菌種的考察：將篩選得到的菌株接種到唯一碳源培養基中，考察菌株對目標污染物的降解效果；

實際環境應用：將經過考察的菌株接種到含有目標污染物的實際環境中考察所述菌株對目標污染物的降解效果。

4.根據權利要求2所述的生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)菌種富集培養：將采集到的活性污泥或土樣接種到唯一碳源培養基中，30℃下培養24-48h至渾濁；

唯一碳源培養基組成：每Na₂HPO₄,2.00g；KH₂PO₄,2.00g；NH₄Cl,0.4g；MgSO₄ 0.20g；目標污染物,3～8.00g；2mL的微量元素液；水定溶到1L，pH 7.0；其中，微量元素液配置：H₃BO₃0.232g，ZnSO₄﹒7H₂O 0.174g，FeSO₄(NH₄)₂SO₄﹒6H₂O 0.116g，CoSO₄﹒7H₂O 0.096g，(NH₄)₆Mo₇O₂₄﹒4H2O 0.022g，CuSO₄﹒5H₂O 8mg，MnSO₄﹒4H₂O 8mg，水定溶到1L(不調pH)；

(2)菌種的初篩：將富集培養物以10％的接種量轉接入新鮮的唯一碳源培養基中，將轉接后的新鮮培養液轉入電場輔助篩選裝置中，在30℃條件下培養至電極板上出現聚集的菌體；

(3)菌種的復篩：將電極板上的菌體用無菌棉簽洗到新鮮的唯一碳源培養基中，30℃條件下培養至菌體OD₆₀₀＝1.5-2時，將該培養液以10％的接種量接種到裝有200mL新鮮的唯一碳源培養基的電場輔助篩選裝置中，按照步驟(2)進行培養；

(4)重復步驟(2)-(3)直至得到純的菌株，將菌種保藏待用。

5.根據權利要求4所述的生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：所述步驟(2)中電場輔助篩選裝置的陰、陽兩極之間加3-12v的電壓。

6.根據權利要求4所述的生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：所述電場輔助篩選裝置是一個兩端帶有鉑電極板的微生物培養裝置，外接一直流電源，可改變直流電源的電壓，實現3-12V范圍內的實驗參數變化。

7.根據權利要求4或6所述的生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：所述電場輔助篩選裝置包括陰極槽、陽極槽、連接液橋和一對外接直流電源的鉑電極板，所述陰極槽、陽極槽和連接液橋將該篩選裝置分為三部分，所述連接液橋置于陰極槽和陽極槽中部，該連接液橋上方的水域深度小于陰極槽和陽極槽的水域深度，所述一對鉑電極板的陰極板置于陰極槽內、陽極板置于陽極槽內。

8.根據權利要求7所述的生物降解用微生物的篩選方法，其特征在于：所述電場輔助篩選裝置的具體操作過程如下：

(1)把富集培養液以10％的接種量接種到含有200mL新鮮培養基的電場輔助篩選裝置中；

(2)把電場輔助篩選槽置于30℃培養箱中，接通電場輔助篩選槽的兩端電源，使陰、陽兩個鉑電極板之間產生一個穩定的電場，通過改變外加電壓調節電場強度；

(3)升壓程序為：初始3-5V保持5h，然后調到5-8V保持5h，然后升到10-12v一直保持到電極板上出現菌體，電極板周圍培養液變渾濁。