[發(fā)明專利]一種采用分光光度法測定醬油中4-甲基咪唑的含量的方法

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• 申請日: 2017-11-01
• 公開（公告）號(hào): CN109752327A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 洪霞;張淑雅;袁超
• 申請（專利權(quán)）人: 鎮(zhèn)江億特生物科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種分光光度法測定醬油中4?甲基咪唑的含量的方法，結(jié)果顯示，樣品中4?甲基咪唑含量范圍為0.057~0.407mg/kg，所測19種醬油的4?甲基咪唑含量均低于GB8817?2001標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的最大允許限量，屬安全食用范圍。本文采用可見光譜法測定醬油中4?甲基咪唑的含量，該方法較傳統(tǒng)薄層層析法而言，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、操作簡單、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，為測定醬油中4?甲基咪唑的含量提供更多一種方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品著色劑檢驗(yàn)領(lǐng)域。具體涉及4-甲基咪唑含量的測定方法。

背景技術(shù)

醬油主要由小麥、大豆和食鹽經(jīng)發(fā)酵、制油等工序釀制而成。焦糖色素是一種世界范圍內(nèi)廣泛使用的食品色素，也是醬油首選著色劑。焦糖色素通常采用氨（銨）法生產(chǎn)，在生產(chǎn)過程中易產(chǎn)生4-甲基咪唑。動(dòng)物毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，4-甲基咪唑?qū)π∈蟮腖D50值為 370mg/kg，可致驚厥甚至誘發(fā)癲癇癥；GB8817-2001明確規(guī)定焦糖色素中4-甲基咪唑的含量不得高于0.02%。目前，焦糖色素中4-甲基咪唑的測定方法主要有薄層層析法、紙層析法、填充柱氣相色譜法、離子色譜法、高效液相色譜法、毛細(xì)管等速電泳法等。本文采用可見光譜法測定醬油中4-甲基咪唑的含量，該方法克服了傳統(tǒng)方法誤差較大的不足，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好、操作簡單、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，為測定醬油中4-甲基咪唑的含量提供更多一種方法。

發(fā)明內(nèi)容

本文采用分光光度法測定醬油4-甲基咪唑的含量的方法，與離子色譜法相比，其操作簡捷且結(jié)果準(zhǔn)確，儀器易普及，適合在各醬油企業(yè)推廣使用。

本發(fā)明包括以下步驟：

（1）樣品預(yù)處理

稱取 5.00g樣品，加水15mL后再加入10%碳酸鈉溶液15 mL，置于 500mL分液漏斗中；加三氯甲烷-無水乙醇（v/v=8∶2）的混合溶劑80m L，劇烈振搖5min；待完全分層后，將下層三氯甲烷-無水乙醇提取液收集于250mL具塞三角瓶中；上層水層用三氯甲烷-無水乙醇混合溶劑70mL提取一次，合并提取液。將提取液中加入0.05mol/L硫酸20mL，劇烈振搖70次，待分層后，收集水層。再加入0.05 mol/L 硫酸15mL劇烈振搖70次，合并水層，加入少許活性炭，至不產(chǎn)生氣泡，微溫，過濾于50mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取 1 m L 上述溶液置于10mL比色管中，加重氮化試劑1mL和10%碳酸氫鈉溶液0.5mL，充分混勻，反應(yīng)1min，加水至刻度，搖勻。

（2）樣品測定

將上述制得的溶液放置10～15min，于440nm 處測定吸光度，將吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品4-甲基咪唑的含量。

具體實(shí)施方式

下面將詳細(xì)說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式：

1.儀器與試劑：

儀器：

FA2004型電子天平：上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；UV-2550型紫外可見分光光度計(jì)：日本島津公司；SB-3200YDTD型超聲波清洗機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；HH-S2型恒溫水浴鍋：金壇市成輝儀器廠

試劑：

三氯甲烷、硫酸、碳酸鈉、鹽酸氫鈉、無水乙醇、對氨基苯磺酸、鹽酸等均為分析純；4-甲基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥98%）：上海阿拉丁工業(yè)公司；醬油：市售

2.方法與結(jié)果

溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取4-甲基咪唑 0.1000g，置于100mL容量瓶中，加10%碳酸氫鈉溶液10mL，然后加水至刻度，4-甲基咪唑的濃度為1mg/m L。