[發(fā)明專利]偽狂犬病毒抗體快速定量檢測(cè)卡及使用方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711054965.9
• 申請(qǐng)日: 2017-11-01
• 公開（公告）號(hào): CN107860921A
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳俊清;章健;吳冠英;王澤洲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州微瑞科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種偽狂犬病毒抗體快速定量檢測(cè)卡，包括檢測(cè)卡外殼和裝配在檢測(cè)卡外殼內(nèi)的試紙條，所述試紙條包括帶壓敏膠的塑料底板，在底板上依次粘貼樣品墊、標(biāo)記物墊、硝酸纖維素膜和吸水紙，所述標(biāo)記物墊由載體基層和標(biāo)記物組成，標(biāo)記物為載體基層上噴涂鑭系熒光檢測(cè)微球和鑭系熒光質(zhì)控微球形成的一層膜，其特征在于：所述硝酸纖維素膜上包被偽狂犬病毒重組抗原為檢測(cè)線，包被兔抗雞lgY抗體為質(zhì)控線，標(biāo)記物為標(biāo)記有偽狂犬病毒蛋白gB和gI(或gE)的重組抗原的熒光檢測(cè)微球和標(biāo)記雞lgY抗體的熒光質(zhì)控微球。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述偽狂犬病毒抗體快速定量檢測(cè)卡，其特征在于：所述偽狂犬病毒抗體快速定量檢測(cè)卡是二合一產(chǎn)品，它既能檢測(cè)gB抗原產(chǎn)生的抗體，又能檢測(cè)gI(或gE)蛋白產(chǎn)生的抗體；所述硝酸纖維素膜上包被偽狂犬病毒重組抗原為檢測(cè)線分別是gB抗原和gI(或gE)抗原，兩種檢測(cè)產(chǎn)品區(qū)分是通過檢測(cè)線位置不同來(lái)區(qū)分的；標(biāo)記偽狂犬病毒蛋白gB和gI(或gE)兩種重組抗原的熒光檢測(cè)微球。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述偽狂犬病毒抗體快速定量檢測(cè)卡，其特征在于：所述偽狂犬病毒蛋白是偽狂犬病毒gB和gI(或gE)蛋白，其為多表位表達(dá)的重組蛋白。

4.一種制備權(quán)利要求2中所述偽狂犬病毒抗體方法，其特征在于：采用生物信息學(xué)技術(shù)（Bioinformatics）對(duì)偽狂犬病毒不同亞型毒株的gB和gI(或gE)基因進(jìn)行比對(duì)，確認(rèn)偽狂犬病毒 gB和gI(或gE)蛋白基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增出目的 gB和gI(或gE)基因，將 gB和gI(或gE)基因亞克隆于Ppic9K載體，轉(zhuǎn)化TOP10感受態(tài)，PCR和酶切鑒定陽(yáng)性克隆，SalⅠ線性化重組穿梭質(zhì)粒pPIC9k-gB和pPIC9k-gI（或Ppic9K-gE），然后電轉(zhuǎn)GS115感受態(tài)，利用G418 抗性進(jìn)行多拷貝整合子初步篩選，提取基因組并做 PCR鑒定，得到陽(yáng)性菌株，經(jīng)誘導(dǎo)發(fā)酵后，上清發(fā)酵液提純目標(biāo)gB和gI(或gE)蛋白，經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測(cè)確定制備重組蛋白分子量。

5.一種制備權(quán)利要求2中所述偽狂犬病毒結(jié)構(gòu)蛋白 gB和gI(或gE)方法，其特征在于：采用生物信息學(xué)技術(shù)原理，應(yīng)用計(jì)算機(jī)對(duì)偽狂犬病毒的結(jié)構(gòu)蛋白 gB和gI(或gE)抗原基因進(jìn)行比對(duì)分析，及抗原表位預(yù)測(cè)，篩選和設(shè)計(jì)偽狂犬病毒特異性的抗原肽序列，并進(jìn)行人工化學(xué)合成抗原肽。

6.一種權(quán)利要求1或2或3或4所述檢測(cè)卡的使用方法，其特征在于： 所述檢測(cè)卡為定量層析檢測(cè)卡，將含有偽狂犬病毒抗體的待測(cè)液滴入檢測(cè)卡的加樣孔中，層析15分鐘，然后使用層析掃描儀對(duì)檢測(cè)卡進(jìn)行掃描，層析掃描儀將掃描所得數(shù)據(jù)無(wú)線傳輸給客戶端，客戶端根據(jù)掃描數(shù)據(jù)計(jì)算得出檢測(cè)卡上質(zhì)控線和檢測(cè)線的熒光信號(hào)強(qiáng)度值，同時(shí)客戶端從云平臺(tái)獲得被檢測(cè)偽狂犬病毒抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，客戶端根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線與質(zhì)控線和檢測(cè)線的熒光信號(hào)強(qiáng)度值的對(duì)照關(guān)系計(jì)算得出待測(cè)液中偽狂犬病毒抗體的含量。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過如下方式導(dǎo)入云平臺(tái)的，首先制備一批檢測(cè)卡，并配制對(duì)應(yīng)的偽狂犬病毒抗體標(biāo)準(zhǔn)品，用檢測(cè)卡層析標(biāo)準(zhǔn)品并用層析掃描儀檢測(cè)，層析掃描儀將檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)處理傳遞給客戶端，客戶端計(jì)算得出標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的檢測(cè)線和質(zhì)控線的熒光信號(hào)強(qiáng)度值，并根據(jù)此數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸從而得到偽狂犬病毒抗體的標(biāo)準(zhǔn)曲線，客戶端將標(biāo)準(zhǔn)曲線傳輸至云平臺(tái)儲(chǔ)存。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的使用方法，其特征在于：所述客戶端計(jì)算得出的標(biāo)準(zhǔn)曲線形成一個(gè)文件，并對(duì)應(yīng)生成條形碼，客戶端通過掃描條形碼可以從云平臺(tái)提取該標(biāo)準(zhǔn)曲線。