[發明專利]一種大豆蛋白中耐熱菌的檢測方法及耐熱菌檢測培養基

在審

• 申請號: 201711050951.X
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107574223A
• 公開（公告）日: 2018-01-12
• 發明（設計）人: 王彩華;劉汝萃;陶愛香;侯君
• 申請（專利權）人: 山東禹王生態食業有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12Q1/04
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司37219
• 代理人: 張宏松

技術領域

本發明涉及一種大豆蛋白中耐熱菌的檢測方法及耐熱菌檢測培養基，屬于食品衛生檢測技術領域。

背景技術

耐熱菌是一類含有芽孢，經熱加工仍然存活，適宜條件下孢子可活化為營養體從而導致食品腐敗的細菌的總稱；耐熱菌廣泛分布于自然界，在蔬菜、水果等農作物上繁殖，并污染以這些農作物為原料的飲食品。然而，耐熱菌與通常的其他菌類相比具有高的耐熱性，因此，耐熱菌的檢測要比通常的其他菌類困難的多。

目前常用的耐熱菌檢測方法有常規的培養檢測法、分子生物學的DNA分析或16SrRNA序列分析方法。由于耐熱菌生長緩慢，常規的培養檢測法需要4～5日才能出檢測報告，分析結果的滯后使之無法及時指導生產。分子生物學的DNA分析或16SrRNA序列分析的方法雖然檢測的時間較短，但檢測成本較高，檢測步驟復雜，一般小型果汁廠家不會采用這種分子生物學的分析方法對日常生產進行質量控制。

另外，目前對耐熱菌的研究主要涉及乳制品、果汁中嗜酸耐熱菌等，其檢測方法與試劑皆針對液體食品，由于大豆蛋白具有較好的凝膠性，因此，現有的液體中或固體中耐熱菌的檢測方法不適用于大豆蛋白。

因此，有必要研發一種能準確、方便的檢測大豆蛋白中耐熱菌的方法。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供一種大豆蛋白中耐熱菌的檢測方法及耐熱菌檢測培養基。

本發明是通過如下技術方案實現的：

一種大豆蛋白中耐熱菌的檢測方法，包括步驟如下：

(1)取大豆蛋白樣品加入無菌生理鹽水中，配制大豆蛋白稀釋液，大豆蛋白樣品與無菌生理鹽水的質量體積比為：24～26:200～260，單位：g/mL；

(2)大豆蛋白稀釋液置于90-100℃下，煮沸后保溫加熱10-20min，然后以5-8℃/min的降溫速度冷卻至室溫；

(3)將冷卻后的大豆蛋白稀釋液與耐熱菌檢測培養基混合均勻，同時將無菌生理鹽水與與耐熱菌檢測培養基混合均勻做平行實驗，耐熱菌檢測培養基凝固后，于36℃±1培養48h±2h進行計算培養基菌落數。

本發明的檢測方法，培養結束后以培養基菌落數的平均值乘以稀釋倍數即為最終耐熱菌結果，單位：CFU/g。

根據本發明優選的，大豆蛋白樣品與無菌生理鹽水的質量體積比為25:210～250，單位：g/mL，最為優選的，大豆蛋白樣品與無菌生理鹽水的質量體積比為25:225，單位：g/mL。

根據本發明優選的，無菌生理鹽水的質量濃度為0.8-0.9％，最為優選的，無菌生理鹽水的質量濃度為0.85％。

根據本發明優選的，大豆蛋白稀釋液的冷卻速度為5-6℃/min。

根據本發明優選的，大豆蛋白稀釋液用流水進行急速冷卻，流水流量為0.15-0.5L/S。

根據本發明優選的，大豆蛋白稀釋液與耐熱菌檢測培養基混合的體積比為：1：15-20。

根據本發明優選的，所述的耐熱菌檢測培養基原料組分如下：

胰蛋白胨4.0-6.0g，牛肉膏0.5-1.5g，酵母浸膏1-3g，葡萄糖0.5-2.5g，瓊脂10-20g，復合維B 0.1-0.5g，氯化三苯基四氮唑0.01-0.03g，蒸餾水1000mL。

進一步優選的，所述的耐熱菌檢測培養基原料組分如下：

胰蛋白胨5.0g，牛肉膏1.0g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1.0g，瓊脂15.0g，復合維B0.2g，氯化三苯基四氮唑0.025g，蒸餾水1000mL。

根據本發明優選的，所述的耐熱菌檢測培養基是按如下方法制備得到：

將胰蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏、葡萄糖、瓊脂、復合維B、氯化三苯基四氮唑加入蒸餾水中，煮沸溶解，調節pH至7.0±0.2，121℃高壓滅菌15min即得。

本發明的有益效果是：

1、本發明的檢測方法不受大豆蛋白凝膠性的約束，可準確檢測大豆蛋白中殘存的耐熱菌數量，檢測方法快速、準確，效果明顯。

2、本發明的耐熱菌培養基簡單，菌落特征顯著，易于計數，尤其是氯化三苯基四氮唑的添加以及添加比例，不受大豆蛋白凝膠性的影響，并對耐熱菌顯示明顯，可以明顯觀察耐熱菌的菌落。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明做進一步的說明，但不限于此。

實施例中所用產品，如無特殊說明，均為市購產品。

實施例1

耐熱菌檢測培養基

耐熱菌檢測培養基原料組分如下：