[發明專利]一種用于診斷牛結核病的流式細胞術檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201711049587.5
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107831316A
• 公開（公告）日: 2018-03-23
• 發明（設計）人: 焦新安;陳祥;夏愛鴻;徐正中;李昕;朱兆成;胡婷;沈也馳;金珊珊;孟闖;潘志明;殷月蘭;孫林
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙)11017
• 代理人: 韓登營,陳辰

1.一種用于診斷牛結核病的FCM檢測試劑盒，所述FCM檢測試劑盒包括：支持介質、熒光標記的CD4表面分子抗體、檢測抗體、特異性刺激劑，其中，所述檢測抗體能特異性檢測牛細胞白介素2，特異性刺激劑為CFP-10和ESAT-6的融合蛋白。

2.根據權利要求1所述的FCM檢測試劑盒，其中，所述檢測抗體為熒光標記的boIL-2單克隆抗體，優選地，所述所述檢測抗體為異硫氰酸熒光素標記的boIL-2單克隆抗體。

3.根據權利要求1所述的FCM檢測試劑盒，其中，所述檢測抗體為熒光標記的boIL-2單克隆抗體6D7，所述boIL-2單克隆抗體6D7由保藏號為CCTCC NO：C2015212的雜交瘤細胞株6D7或其傳代細胞株分泌產生。

4.根據權利要求1所述的FCM檢測試劑盒，其中，所述檢測抗體為boIL-2單克隆抗體6D7；其通過熒光標記的羊抗鼠二抗檢測；優選地，所述檢測抗體boIL-2單克隆抗體6D7通過Alexa488熒光標記的羊抗鼠二抗檢測。

5.根據權利要求1所述的FCM檢測試劑盒，其中，所述熒光標記的CD4表面分子抗體為Alexa647熒光標記的CD4表面分子抗體；優選地，所述CD4表面分子抗體為CC8；優選地，所述CD4表面分子抗體與所述檢測抗體在使用時同時加入樣品中以用于表面和胞內的同時染色。

6.根據權利要求1所述的FCM檢測試劑盒，其中，所述支持介質包括聚丙乙烯V型抗體染色板。

7.根據權利要求1所述的FCM檢測試劑盒，其中，所述FCM檢測試劑盒中還包括下列試劑中的一種或多種：

1)陰性對照和陽性對照；

2)蛋白轉運抑制劑；

3)固定劑、破膜劑；以及

4)洗滌液。

8.根據權利要求7所述的FCM檢測試劑盒，其中，所述陰性對照的組分與進行檢測的樣本組的各組分相同，但不添加刺激劑；所述陽性對照的組分與進行檢測的樣本組的各組分相同，但用非特異性刺激劑替換特異性刺激劑。

9.根據權利要求8所述的FCM檢測試劑盒，其中，非特異性刺激劑為ConA；

所述蛋白轉運抑制劑為布雷非德菌素A，

所述固定劑為含4％的多聚甲醛PBS溶液，

所述破膜劑為含1％皂甙、0.05％疊氮化鈉的Hanks溶液，

所述洗滌液為含1％牛血清蛋白的磷酸鹽緩沖液，優選地，所述FCM檢測試劑盒還包括細胞培養液。

10.根據權利要求1～9任一項所述的FCM檢測試劑盒在用于非診斷目的的牛分枝桿菌感染檢測中的應用，其中，所述非診斷目的包括流行病學分析和研究、離體組織進行檢測、表位鑒定研究以及定性和定量檢驗牛分枝桿菌抗原特異的boIL-2。