[發(fā)明專利]一種分離純化他克莫司的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711049488.7
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107556327A
• 公開（公告）日: 2018-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李小剛;張鷹;葉驥;李曉明;孫益林;蔣逸云
• 申請（專利權(quán)）人: 無錫福祈制藥有限公司
• 主分類號: C07D498/18
• 分類號: C07D498/18
• 代理公司: 北京商專永信知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙)11400
• 代理人: 高之波,儲振

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種分離純化他克莫司的方法。

背景技術(shù)

他克莫司又名FK-506(Tacrolimus)，是由日本藤澤制藥公司于1982年從筑波鏈霉菌代謝產(chǎn)物中提取的一種大環(huán)內(nèi)酯類免疫抑制劑。本品對T細胞具有選擇性的抑制作用，主要是通過抑制TH細胞釋放IL-2、IL-3、IFN-γ，以及抑制IL-2R的表達而發(fā)揮其強大的免疫抑制作用。適用于防治器官移植后的排斥反應，其臨床療效是環(huán)胞素的100倍。

目前，他克莫司主要通過發(fā)酵法進行制備，因此在發(fā)酵過程中會產(chǎn)生諸多異構(gòu)體或者類似物，采用傳統(tǒng)的反相樹脂、改性硅膠進行分離純化的技術(shù)方案所最終純化得到的他克莫司的純度并不理想，通常只能達到98％左右。純化后的他克莫司中仍然存在諸多異構(gòu)體等雜質(zhì)，從而對由他克莫司所制成的免疫制劑的藥效造成一定的影響，并可能對患者造成較大的副作用。

有鑒于此，有必要對現(xiàn)有技術(shù)中的他克莫司進行分離并純化的技術(shù)方案予以改進，以解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于揭示一種分離純化他克莫司的方法，用以實現(xiàn)對發(fā)酵法制備他克莫司所形成的含有他克莫司的發(fā)酵液中直接進行純化操作，以制備高純度的他克莫司，以提高由他克莫司所制成的免疫制劑的藥效。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種分離純化他克莫司的方法，包括以下步驟：

(1)制備低色譜純度他克莫司發(fā)酵提取液，使用0.45微米的微孔有機濾膜抽濾后，待用；

(2)在第一套中壓層析色譜設(shè)備中使用層析硅膠作為填料，使用丙酮和/或乙醇進行清洗和平衡；

(3)將低色譜純度他克莫司發(fā)酵提取液在第一套中壓層析色譜設(shè)備中層析，使用有機溶劑進行洗脫，收集洗脫液，洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，用有機溶劑溶解后再次使用0.45微米的微孔有機濾膜抽濾；

(4)在第二套中壓層析色譜設(shè)備中使用反向硅膠作為填料，待用；

(5)使用至少含丙酮的有機溶劑清洗反向硅膠，并將步驟(3)中所得樣液配置為適宜上樣的溶液，上樣后經(jīng)過多段洗脫，得到洗脫液；

(6)將步驟(5)中所得洗脫液多批合并，使用納濾膜濃縮，并進行脫色處理；

(7)將步驟(6)中所得濃縮液進行結(jié)晶，并烘干。

作為本發(fā)明的進一步改進，所述步驟(1)中他克莫司發(fā)酵提取液的色譜純度為60％。

作為本發(fā)明的進一步改進，所述步驟(2)中的層析硅膠的粒徑為300～400目，壓力條件為60psi～90psi。

作為本發(fā)明的進一步改進，所述步驟(3)中的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的蒸發(fā)溫度為35℃溫度，轉(zhuǎn)速為70rpm，真空度為-0.09MPa～-0.1MPa。

作為本發(fā)明的進一步改進，所述步驟(6)中所選用的納濾膜的分子量為200，濃縮條件為：溫度20℃～60℃、壓力0.8MPa～1.2MPa。

作為本發(fā)明的進一步改進，所述步驟(7)中，結(jié)晶前的濃縮液應滿足以下條件：

濃度為75g/L～80g/L、PH9.30～9.60。

作為本發(fā)明的進一步改進，所述步驟(7)中的結(jié)晶具體為：使用純蒸汽加熱步驟(6)中所得的濃縮液至35℃～55℃，隨后立即使用0.45微米的微孔有機濾膜抽濾，并用0℃～70℃的丙酮淋洗，以進行結(jié)晶。

作為本發(fā)明的進一步改進，所述步驟(7)中的烘干具體為：結(jié)晶后的他克莫司晶體置于真空烘箱中進行干燥，所述真空烘箱中的烘干溫度設(shè)定為30℃～40℃，真空烘箱的真空度為-0.098MPa～-0.102MPa。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：通過本發(fā)明所揭示的一種分離純化他克莫司的方法，可實現(xiàn)從含有他克莫司的發(fā)酵液中直接進行純化操作，并顯著地提高了他克莫司的純度，間接地提高了由他克莫司所制成的免疫制劑的藥效。

附圖說明

圖1為實施例1所最終制得的他克莫司的HPLC圖譜；

圖2為實施例2所最終制得的他克莫司的HPLC圖譜。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖所示的各實施方式對本發(fā)明進行詳細說明，但應當說明的是，這些實施方式并非對本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)這些實施方式所作的功能、方法、或者結(jié)構(gòu)上的等效變換或替代，均屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

實施例1：

本實施例所示出的一種分離純化他克莫司的方法，包括以下步驟：