[發(fā)明專利]一種雙脫氧核苷封閉的寡核苷酸的制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711049299.X
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN109735607A
• 公開（公告）日: 2019-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張弛宇;張夢玲;胡軼紅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海巴斯德研究所
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 王正君;肖艷

1.一種檢測突變體的試劑，其特征在于，所述的試劑包括以下組分：

(a)第一引物，所述第一引物結(jié)構(gòu)如下式I所示：

Z₁-F₁ (I)

式中，

F₁為任選的熒光基團或淬滅基團；

Z₁為互補結(jié)合區(qū)，長度為L₁個核苷酸；

其中，Z₁任選的與F₂相連，其中F₂為任選的熒光基團或淬滅基團；并且F₁和F₂兩者中一個為熒光基團，另一個為淬滅基團；

(b)第二引物，所述第二引物為正常引物或與第一引物結(jié)構(gòu)相同；

(c)高保真DNA聚合酶，所述高保真DNA聚合酶為具有外切活性的DNA聚合酶；和

(d)非高保真DNA聚合酶，所述非高保真DNA聚合酶不具有外切活性的DNA聚合酶；

(e)末端轉(zhuǎn)移酶；和

(f)ddNTP。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述高保真DNA聚合酶選自下組：KOD^TMDNA聚合酶、HS DNA聚合酶、Q5^TM超保真DNA聚合酶，pfu DNA聚合酶，Blend Taq DNA聚合酶、Phi9DNA聚合酶、Klenow酶、或其組合。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述非高保真DNA聚合酶選自下組：Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶、或其組合。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述高保真DNA聚合酶與非高保真DNA聚合酶的比例為(0.01-0.5):1，較佳地為(0.03-0.2):1；更佳地為(0.04-0.08):1。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述末端轉(zhuǎn)移酶的添加量為0.3-1U/μl，較佳地，0.6-0.95U/μl，更佳地，0.80-0.93U/μl。

6.一種核酸擴增體系，其特征在于，所述的體系包括：用于擴增的緩沖體系和位于所述體系中的權(quán)利要求1所述的試劑。

7.一種核酸擴增方法，其特征在于，所述方法包括步驟：利用如權(quán)利要求1所述的試劑或如權(quán)利要求6所述的擴增體系，對待測樣品進行核酸擴增。

8.一種非治療性和非診斷性檢測突變體的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(a)利用如權(quán)利要求1所述的試劑、權(quán)利要求6所述的體系或權(quán)利要求7所述的方法，對待測樣品進行實時熒光核酸擴增；和(b)分析實時熒光核酸擴增反應(yīng)擴增曲線，從而判定所述待測樣品是否存在突變、和/或確定所述待測樣品的突變位點。

9.一種如權(quán)利要求1所述的試劑、權(quán)利要求6所述的體系或權(quán)利要求7所述的方法的用途，其特征在于，用于點突變、單核苷酸多態(tài)性、插入和缺失突變的單重或多重檢測。

10.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括：(a)如權(quán)利要求1所述的試劑；(b)容器。