[發明專利]一種鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記與應用在審
| 申請號： | 201711048490.2 | 申請日： | 2017-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN107557447A | 公開（公告）日： | 2018-01-09 |
| 發明（設計）人： | 高玉龍;李文正;王丙武;宋中邦;李梅云;焦芳嬋;吳玉萍;李永平;徐向麗 | 申請（專利權）人： | 云南省煙草農業科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業)53116 | 代理人： | 姜開俠,謝喬良 |
| 地址： | 650031*** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鑒別 煙草 轉運 基因 nthma4 野生型 突變體 分子 標記 應用 | ||
1.一種鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記，其特征在于與NtHMA4野生型位點檢測相關的標記，其核苷酸序列如Seq No.1所示；與NtHMA4突變體位點檢測相關的標記，其核苷酸序列如Seq No.2所示。
2.根據權利要求1所述的鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記，其特征在于NtHMA4突變體為hma4-4h12突變體。
3.一種權利要求1或2所述鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記的引物對，其特征在于所述的引物對為：
上游引物：HMA4-F5：TAGAGTGTAGAGGAAAAATAGAAAGAAGAG；
下游引物：HMA4-R5：TCATGAATAACAATGACAGTCTCT。
4.一種權利要求1或2所述的鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記的應用，其特征在于所述的鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記在利用突變體利用突變體hma4-4h12改良煙草低鎘特性回交轉育過程中的應用。
5.一種權利要求1或2所述的鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記的鑒定方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）利用PCR引物HMA4-F5 / HMA4-R5對煙草基因組進行PCR擴增；
（2） PCR產物經純化后利用AIwNI酶切，如果PCR產物能被AIwNI酶切，則為野生型；如果PCR產物不能被AIwNI酶切，則為突變體。
6.根據權利要求5所述的鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記的鑒定方法，其特征在于步驟（1）所述的PCR擴增利用ExTaq進行（Takara），25μL體系，PCR體系包括以下成分：
ExTaq0.125μL
10x ExTaq Buffer(Mg2+ free)2.5μL
MgCl22μL
dNTP(2.5mM)2μL
基因組DNA0.5μL
上游引物HMA4-F5（10μM）0.5μL
下游引物HMA4-R5（10μM）0.5μL
滅菌超純水 16.875 μL。
7.根據權利要求5所述的鑒別煙草鎘轉運基因NtHMA4野生型和突變體的分子標記的鑒定方法，其特征在于步驟（1）所述的PCR擴增反應條件為：94℃預變性5min；94℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 90s，35個循環； 72℃ 7min。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于云南省煙草農業科學研究院，未經云南省煙草農業科學研究院許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201711048490.2/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
